ICS11.080.01

CCSC47

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

代替GB/T19972—2018

醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物第7部分：

選擇、使用和結(jié)果判斷指南

Sterilizationofhealthcareproducts—Biologicalindicators—Part7:Guidancefor

theselection,useandinterpretationofresults

（ISO11138-7:2019，IDT）

(征求意見稿)

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局

發(fā)布

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

目??次

前??言.............................................................................IV

引??言..............................................................................V

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術(shù)語和定義.........................................................................1

4總則...............................................................................4

5生物指示物特性.....................................................................6

5.1概述...........................................................................6

5.2產(chǎn)品直接染菌用的試驗(yàn)微生物懸液.................................................6

5.3染菌載體.......................................................................7

5.4自含式生物指示物...............................................................7

6供方的選擇.........................................................................7

6.1概述...........................................................................7

6.2文件............................................................................8

7過程開發(fā)中的生物指示物..............................................................9

7.1概述............................................................................9

7.2過度殺滅處理...................................................................10

7.3生物指示物和生物負(fù)載組合法.....................................................10

7.4生物負(fù)載法.....................................................................11

8滅菌確認(rèn)的生物指示物...............................................................11

8.1概述...........................................................................11

8.2生物指示物的放置和處理.........................................................11

8.3滅菌器鑒定.....................................................................12

8.4性能鑒定.......................................................................12

8.5確認(rèn)的審核和批準(zhǔn)...............................................................12

8.6再次鑒定.......................................................................12

9常規(guī)監(jiān)測(cè)中的生物指示物.............................................................12

9.1概述...........................................................................12

9.2生物指示物的放置和處理.........................................................13

9.3過程挑戰(zhàn)裝置（PCD）............................................................13

10結(jié)果判斷和接受標(biāo)準(zhǔn)................................................................13

10.1概述..........................................................................13

10.2結(jié)果判斷......................................................................14

I

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

11生物指示物標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用..............................................................14

11.1使用者對(duì)生物指示物性能的一般評(píng)價(jià)..............................................14

11.2試驗(yàn)微生物標(biāo)稱總數(shù)............................................................14

11.3抗力測(cè)定......................................................................15

11.4z值的測(cè)定.....................................................................17

11.5F（T，z）等效滅菌值的測(cè)定.........................................................19

11.6建立芽孢對(duì)數(shù)減少（SLR）.......................................................19

11.7無菌保證水平（SAL）的計(jì)算.....................................................20

11.8測(cè)試設(shè)備.....................................................................20

12培養(yǎng)條件.........................................................................20

12.1概述.........................................................................20

12.2培養(yǎng)溫度.....................................................................21

12.3培養(yǎng)時(shí)間.....................................................................21

12.4生長(zhǎng)培養(yǎng)基的選擇.............................................................21

13對(duì)第三方的要求...................................................................22

13.1概述.........................................................................22

13.2對(duì)重復(fù)樣本和生物指示物總數(shù)的最低要求.........................................22

13.3測(cè)試設(shè)備.....................................................................22

14人員培訓(xùn).........................................................................23

15貯存和搬運(yùn).......................................................................23

16生物指示物的處理.................................................................23

附錄A（資料性）微生物滅活動(dòng)力學(xué)和計(jì)數(shù)方法.........................................24

附錄B（資料性）過程挑戰(zhàn)裝置.......................................................28

附錄C（資料性）部分陰性法測(cè)定D值.................................................29

附錄D（資料性）使用者準(zhǔn)備的生物指示物的文字記錄示例...............................45

附錄E（資料性）z值的計(jì)算.........................................................49

附錄F（資料性）存活曲線方法測(cè)量D值..............................................52

附錄G（資料性）存活與殺滅反應(yīng)特性.................................................56

參?考?文?獻(xiàn).......................................................................57

II

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

引??言

GB/T18281《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物》是有關(guān)生物指示物的通用性和專用性標(biāo)準(zhǔn)。GB/T18281

旨在提供生物指示物的要求、選擇和使用指南和縮短培養(yǎng)時(shí)間的方法，擬由八個(gè)部分構(gòu)成：

——第1部分：通則。目的在于提供生物指示物的通用要求。

——第2部分：環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物。目的在于提供環(huán)氧乙烷滅菌用生物指示物的專用要求。

——第3部分：濕熱滅菌用生物指示物。目的在于提供濕熱滅菌滅菌用生物指示物的專用要求。

——第4部分：干熱滅菌用生物指示物。目的在于提供干熱滅菌用生物指示物的專用要求。

——第5部分：低溫蒸汽甲醛滅菌用生物指示物。目的在于提供低溫蒸汽甲醛滅菌用生物指示物的

專用要求。

——第6部分：過氧化氫滅菌過程用生物指示物。目的在于提供過氧化氫滅菌用生物指示物的專用

要求。

——第7部分：選擇、使用和結(jié)果判斷指南。目的在于提供生物指示物的正確選擇和使用的指南。

——第8部分：縮短生物指示物培養(yǎng)時(shí)間的確認(rèn)方法。目的在于提供縮短生物指示物培養(yǎng)時(shí)間的確

認(rèn)方法。

應(yīng)用于滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和監(jiān)測(cè)時(shí)，本文件對(duì)生物指示物的選擇、使用和結(jié)果判斷提供指南。

本文件所敘述的步驟具有通用性質(zhì)，其本身并不能作為醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌開發(fā)，確認(rèn)以及監(jiān)測(cè)綜合的程

序。本文件的目的并非為某個(gè)過程中強(qiáng)制使用生物指示物，而是在假若使用生物指示物時(shí)，為其正確選

擇和使用提供指南，避免出現(xiàn)誤導(dǎo)的結(jié)果。

本文件中，使用者可獲得針對(duì)特定滅菌過程以及關(guān)鍵參數(shù)的生物指示物選擇指南，及正確使用該生

物指示物的指南。

使用者宜選擇適合其采用的特定滅菌過程的生物指示物。由于各滅菌過程的差異很大，生物指示物

制造商難以預(yù)見其產(chǎn)品所有可能的用途，故制造商只能標(biāo)識(shí)其生物指示物用于某特定用途。為所采用的

特定滅菌過程恰當(dāng)?shù)剡x擇、使用、回收和結(jié)果判斷，宜由使用者負(fù)責(zé)。

生物指示物使用前貯存和運(yùn)輸?shù)臈l件、生物指示物的使用或滅菌器過程參數(shù)可能對(duì)生物指示物產(chǎn)生

不良影響，此外暴露于過程后使用的培養(yǎng)技術(shù)，包括培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基類型、廠家和特定批次也可能影

響到與復(fù)蘇和生長(zhǎng)相關(guān)的實(shí)測(cè)抗力。因此，宜遵照生物指示物制造商的建議貯存和使用。滅菌處理后，

生物指示物宜無菌轉(zhuǎn)移（如適用）以及按生物指示物制造商規(guī)定進(jìn)行培養(yǎng)。

宜指出，生物指示物并非用來指示滅菌后的物品確實(shí)無菌。而是用來測(cè)試某一已知滅菌過程和采用

的滅菌設(shè)備的有效性，這種測(cè)試是按照無菌保證水平對(duì)微生物致死性進(jìn)行評(píng)估的原理進(jìn)行的。這類研究

宜由訓(xùn)練有素合適的人員進(jìn)行。

注：本文件提供的一般信息，同樣適用于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)未提及的過程和生物指示物。例如：新的和正在開發(fā)的滅菌

過程。

IV

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌生物指示物第7部分：選擇、使用和結(jié)果判斷

指南

1范圍

應(yīng)用于滅菌過程的開發(fā)、確認(rèn)和常規(guī)監(jiān)測(cè)時(shí)，本文件提供了對(duì)生物指示物的選擇、使用和結(jié)果判斷

的指南。

本文件適用于所有的生物指示物。

本文件未考慮那些僅靠物理方式去除微生物的過程，如過濾法。

本文件不適用于各種組合過程的使用，如，清洗消毒器或者管道的沖洗和汽蒸。

本文件未規(guī)定用于在大氣壓下對(duì)隔離器和室內(nèi)生物去污過程的汽化過氧化氫過程進(jìn)行監(jiān)測(cè)的生物

指示物的選擇和使用的要求。

本文件不適用于液體浸泡滅菌過程。

2規(guī)范性引用文件

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

無菌技術(shù)aseptictechnique

用于微生物污染引入風(fēng)險(xiǎn)最小化的條件和程序

［來源：ISO11139:2018,3.16］

3.2

生物負(fù)載bioburden

一件產(chǎn)品和/或無菌屏障系統(tǒng)的表面或內(nèi)部的存活微生物的總數(shù)。

[來源：ISO11139:2018,3.23]

3.3

生物指示物biologicalindicator

BI

含有對(duì)規(guī)定的滅菌過程具有確定抗力的活微生物的測(cè)試系統(tǒng)。

[來源：ISO11139:2018,3.29]

1

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

3.4

D值Dvalue

D10值D10value

在規(guī)定條件下，滅活90%的試驗(yàn)微生物總數(shù)所需的時(shí)間或劑量。

[來源：ISO11139:2018，3.75]

3.5

持續(xù)時(shí)間holdingtime

過程參數(shù)持續(xù)保持在其規(guī)定公差內(nèi)的時(shí)間。

[來源：ISO11139:2018，3.133]

3.6

染菌載體inoculatedcarrier

已在其上或其內(nèi)放置了一定數(shù)量的活性測(cè)試微生物的支持材料

[來源：ISO11139:2018，3.144]

3.7

染菌inoculation

在物品內(nèi)部或者表面添加規(guī)定數(shù)量的特定微生物實(shí)體。

3.8

對(duì)數(shù)減少值logreduction

LR

存活微生物數(shù)目的減少值。

注：以lg為單位表示

3.9

運(yùn)行鑒定operationalqualification

OQ

獲得證據(jù)，并形成文件的過程，證明按照設(shè)備運(yùn)行程序使用設(shè)備時(shí)，已安裝的設(shè)備是在預(yù)定范圍內(nèi)

運(yùn)行。

[來源：ISO11139:2018,3.220.3]

3.10

性能鑒定performancequalification；PQ

獲得證據(jù)，并形成文件的過程，證明已安裝且按運(yùn)行程序運(yùn)行的設(shè)備，能按預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)持續(xù)穩(wěn)定地

生產(chǎn)出滿足產(chǎn)品規(guī)范要求的產(chǎn)品。

[來源：ISO11139:2018,3.220.4]

3.11

過程挑戰(zhàn)裝置processchallengedevice；PCD

2

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

對(duì)于清潔、消毒或滅菌過程構(gòu)成特定的抗力的裝置，用于評(píng)價(jià)過程的性能。

[來源：ISO11139:2018,3.205]

3.12

過程挑戰(zhàn)位點(diǎn)processchallengelocation；PCL

能模擬滅菌因子在一批擬滅菌的物品中處于“最不利狀態(tài)”的位置。

[來源：ISO11139:2018,3.206]

3.13

過程參數(shù)processparameter

過程變量的規(guī)定值。

注1：滅菌過程的規(guī)定值包括過程參數(shù)及其公差。

[來源：ISO11139:2018,3.211]

3.14

過程變量processvariable

清潔、消毒，包裝或滅菌過程范圍內(nèi)的化學(xué)或物理特征，其變化可改變過程的有效性。

示例：時(shí)間，溫度，壓力，濃度，濕度，波長(zhǎng)。

[來源：ISO11139:2018,3.213]

3.15

參考微生物referencemicroorganism

通過公認(rèn)的菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的微生物菌株。

[來源：ISO11139:2018,3.228]

3.16

抗力儀resistometer

設(shè)計(jì)用于在滅菌過程產(chǎn)生物理和/或化學(xué)變量組合的測(cè)試設(shè)備。

[來源：ISO11139:2018,3.233]

3.17

芽孢對(duì)數(shù)減少值spore-log-reduction

SLR

用來描述芽孢數(shù)減少的底數(shù)為10的負(fù)指數(shù)。

注1：用對(duì)數(shù)表示。

[來源：ISO11139:2018,3.260]

3.18

無菌的sterile

無存活微生物的。

[來源：ISO11139:2018,3.271]

3

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

3.19

無菌保證水平sterilityassurancelevel

SAL

滅菌后產(chǎn)品上存在單個(gè)活微生物的概率。

[來源：ISO11139:2018,3.275]

3.20

滅菌sterilization

經(jīng)確認(rèn)的使產(chǎn)品無存活微生物的過程。

注：在滅菌過程中，微生物滅活的性質(zhì)是呈指數(shù)級(jí)的關(guān)系；這樣在單個(gè)產(chǎn)品上微生物的存活能用概率來表示。雖然

這個(gè)概率能被降到很低，但不可能降到零。

[來源：ISO11139:2018,3.277]

3.21

存活與殺滅區(qū)間survival-killwindow

在規(guī)定的條件下滅菌處理時(shí)，生物指示物從全部存活微生物過渡到全部殺滅微生物的暴露程度。

[來源：ISO11139:2018,3.292]

3.22

第三方thirdparty

在所涉及的問題上公認(rèn)的獨(dú)立于有關(guān)各方的個(gè)人或機(jī)構(gòu)。

注1：有關(guān)各方通常是供方（第一方）和需方（第二方）。

3.23

z值z(mì)value

熱力滅菌或消毒過程中，使D值變化十倍所需的暴露溫度變化值。

注1：以攝氏度（℃）表示

[來源：ISO11139:2018,3.326]

4通則

4.1本文件提供生物指示物的指南，生物指示物通常適用于所有的滅菌過程，包括ISO14937中的新滅

菌過程。

4.2生物指示物的使用通常記錄在使用者的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、規(guī)程和/或說明書中。

注：采用質(zhì)量管理體系例如ISO13485通常滿足此條款的要求。

4.3生物指示物宜與物理和/或化學(xué)的測(cè)量方法結(jié)合以證實(shí)滅菌過程的有效性。當(dāng)滅菌過程中的物理和/

或化學(xué)變量超出了規(guī)定限值，宜對(duì)滅菌器不能獲得其過程參數(shù)的原因進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)問題進(jìn)行修正。類

似地，物理和/或化學(xué)變量在規(guī)定限值內(nèi)，而生物指示物出現(xiàn)失敗，宜對(duì)滅菌器不能獲得其過程參數(shù)的

原因進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)問題進(jìn)行修正。宜建立系統(tǒng)和/或程序用以評(píng)價(jià)周期過程限值的任何偏離，并將偏

離可接受的原因完整地形成文件。

4.4一個(gè)合格的生物指示物包括載體材料、包裝和無需特殊容器設(shè)備便可處理的某種微生物成分。生長(zhǎng)

條件宜恰當(dāng)?shù)匦纬晌募?，使用宜?jiǎn)單并恰當(dāng)?shù)拿枋鲆员M可能避免使用者誤解。

4

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

4.5生物指示物代表一種滅菌過程的微生物挑戰(zhàn)，并用于驗(yàn)證某個(gè)滅菌過程能否滅活那些對(duì)于滅菌過程

具有確定抗力的參考微生物。生物指示物所采用的試驗(yàn)微生物對(duì)滅菌具有的抗力，往往超過通常的生物

負(fù)載微生物的抗力，不過，亦有一些微生物可能表現(xiàn)出超過試驗(yàn)微生物的抗力。一個(gè)合適的生物指示物

對(duì)特定滅菌過程的挑戰(zhàn)宜超過器械上實(shí)際生物負(fù)載對(duì)這個(gè)滅菌過程的挑戰(zhàn)，這種挑戰(zhàn)是微生物的數(shù)量及

其抗力的聯(lián)合。若有理由認(rèn)為待處理的物品可能受到某種具有特殊抗力的微生物污染，則可根據(jù)生物負(fù)

載情況，要求延長(zhǎng)滅菌加工。

4.6生物指示物不用于制造商在其產(chǎn)品標(biāo)簽上規(guī)定以外的滅菌過程，作為生物指示物候選微生物及菌株

的選擇基于它們對(duì)特定滅菌方法中的已知抗力。使用不恰當(dāng)?shù)纳镏甘疚锟赡艹霈F(xiàn)誤導(dǎo)性的結(jié)果。使用

者宜保證生物指示物已經(jīng)被認(rèn)定適用于所用的特定滅菌條件。除標(biāo)簽中給出的信息外，這可能還需要其

他信息。當(dāng)在參考條件之外使用生物指示物時(shí)，使用者可要求提供有關(guān)指示物預(yù)期反應(yīng)的信息，例如次

優(yōu)濕度條件對(duì)環(huán)氧乙烷過程中使用生物指示物的影響。在生產(chǎn)商標(biāo)示的建議使用范圍外使用生物指示物，

宜充分說明該生物指示物對(duì)于特定滅菌過程的抗力。生物指示物的反應(yīng)與過程參數(shù)之間的關(guān)系宜論證清

楚。

4.7負(fù)責(zé)產(chǎn)品滅菌的使用者宜確保用于驗(yàn)證和/或常規(guī)監(jiān)測(cè)給定滅菌過程的生物指示物類型適合該用途。

4.8宜始終遵循制造商關(guān)于生物指示物的運(yùn)輸、貯存和使用的建議。否則會(huì)影響生物指示物的性能特征。

如果使用者從生物指示物的初級(jí)包裝中取出染菌載體，或在初級(jí)包裝上添加額外的包裝，其抗力特性會(huì)

發(fā)生變化。關(guān)于這種變化的程度，宜向制造商尋求指導(dǎo)，或者使用者可測(cè)定抗力特性的變化。使用者宜

將染菌載體的性能特征適合其使用形成文件。

4.9生物指示物的使用不得超過制造商規(guī)定的有效期

4.10用生物指示物進(jìn)行滅菌過程開發(fā)、對(duì)滅菌進(jìn)行確認(rèn)和/或常規(guī)監(jiān)測(cè)的使用者，宜經(jīng)過使用生物

指示物的合適的培訓(xùn)。

4.11滅菌過程完成和培養(yǎng)之間的時(shí)間宜在生產(chǎn)商規(guī)定時(shí)間內(nèi)，或按8.2.3所述進(jìn)行判定。

4.12宜采用無菌技術(shù)，把經(jīng)過滅菌過程處理后的微生物轉(zhuǎn)種到合適的復(fù)蘇培養(yǎng)基。

4.13自含式生物指示物是專門為消除無菌處理的需要而設(shè)計(jì)，因?yàn)樗杏绊懞筇幚硭信囵B(yǎng)的成分

都包含在其無需打開的初級(jí)包裝。（見5.4）

4.14ISO11138對(duì)制造商應(yīng)提供的生物指示物信息提出了要求。這些信息可以在標(biāo)簽上提供，作為

插頁(yè)或作為生物指示物的通用規(guī)格。ISO11138還包括抗力特性的最低要求。所給出試驗(yàn)條件和方法作

為參考方法。

4.15生物指示物使用者來自各個(gè)工業(yè)部門，私人企業(yè)和醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)。通常，并不要求這些使用者

進(jìn)行生物指示物的抗力檢驗(yàn)，但對(duì)他們各自的質(zhì)量保證體系會(huì)有不同的要求，其中可能包括監(jiān)管機(jī)構(gòu)或

公告機(jī)構(gòu)的審核（見6.2.2）。如使用者希望進(jìn)行微生物數(shù)量和/或抗力測(cè)定，需按生產(chǎn)商規(guī)定的方法

進(jìn)行。

4.16必要時(shí)，使用者對(duì)抗力特性的驗(yàn)證是審核的替代和/或補(bǔ)充。

5生物指示物特性

5.1概述

5

GB/T18281.7—XXXX/ISO11138-7:2019

5.1.1生物指示物提供了直接評(píng)估滅菌過程的微生物致死性的方法（見參考文獻(xiàn)[8]和[9]）。當(dāng)與物理和/

或化學(xué)過程監(jiān)測(cè)器結(jié)合使用時(shí)，生物指示物能指示給定滅菌過程的有效性。

生物指示物最簡(jiǎn)單的形式是裝在初級(jí)包裝里的一個(gè)染菌載體。染菌載體可有多種形式，包括紙

條，細(xì)線，金屬片或其他適合染菌的載體。選擇的初級(jí)包裝允許滅菌劑進(jìn)入染菌載體，且處理后保持無

菌屏障。

5.1.2只有在通過適當(dāng)?shù)臏缇^程開發(fā)、驗(yàn)證和監(jiān)測(cè)計(jì)劃確定的所需物理和/或化學(xué)參數(shù)和微生物結(jié)果

得到實(shí)現(xiàn)時(shí)，滅菌過程宜視為合格。未能達(dá)到所需的物理和/或化學(xué)參數(shù)和/或微生物挑戰(zhàn)是宣告滅菌過

程不合格的基礎(chǔ)（見ISO13485和ISO9001）。

5.1.3生物指示物包含規(guī)定數(shù)目的試驗(yàn)微生物，其呈現(xiàn)方式便于滅菌過程后的復(fù)蘇。例如采用環(huán)氧乙

烷滅菌過程的試驗(yàn)微生物可以是枯草桿菌芽孢或萎縮芽孢桿菌，見ISO11138-2。對(duì)于蒸汽滅菌或濕熱

滅菌，所用的試驗(yàn)微生物可以是嗜熱脂肪地桿菌芽孢的合適菌株的孢子，見ISO11138-3。如果證明除

細(xì)菌孢子外的試驗(yàn)微生物對(duì)滅菌過程具有適當(dāng)?shù)牡挚沽?，則可以使用試驗(yàn)微生物。

5.1.4確定生物指示物抗力特性，例如D值的所有計(jì)算方法，都基于滅活遵循一級(jí)動(dòng)力學(xué)。其要求是：

存活曲線的線性相關(guān)性的r2值不小于0.8（見附錄E和附錄F）。試驗(yàn)微生物的菌株、生產(chǎn)方式、菌懸

液、載體和包裝材料及測(cè)試條件等都會(huì)影響生物指示物的抗力特性（見ISO11138-1）。

5.1.5生物指示物的設(shè)計(jì)和結(jié)構(gòu)可導(dǎo)致獨(dú)特的抗力特性，也可根據(jù)生物指示物用于滅菌過程的開發(fā)，

確認(rèn)還是常規(guī)監(jiān)測(cè)而不同，如果用于常規(guī)監(jiān)測(cè)的生物指示物的設(shè)計(jì)與用于確認(rèn)滅菌過程的設(shè)計(jì)不同，則

確認(rèn)過程中的挑戰(zhàn)宜與常規(guī)監(jiān)測(cè)過程中的過程挑戰(zhàn)相關(guān)聯(lián)。

5.1.6取決于裝載內(nèi)部的放置以及在分散位點(diǎn)上特定的滅菌過程條件，同一生產(chǎn)批次的生物指示物可

顯示不同的存活能力（見7.2.3）。生物指示物使用者宜注意將10個(gè)生物指示物分布于裝載內(nèi)部并不

能保證測(cè)試的可重復(fù)性，這是由于整個(gè)腔室以及裝載內(nèi)存在致死性的差異（見11.3.1的注）。

5.2產(chǎn)品直接染菌用的試驗(yàn)微生物懸液

5.2.1若生物指示物在周期開發(fā)和其他研究中無法應(yīng)用時(shí)，有必要將試驗(yàn)微生物直接染菌在產(chǎn)品上或

產(chǎn)品中。直接染菌可適用于評(píng)估滅菌相關(guān)因素：例如產(chǎn)品的可滅菌性、裝置中較難滅菌位點(diǎn)的證實(shí)，以

及局部微生物的影響，例如濕熱與干熱環(huán)境的比較。

選擇產(chǎn)品或滅菌裝載內(nèi)“最難滅菌”的原理形成文件，該文件宜基于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)或者從特定滅菌方法

學(xué)的事先知識(shí)。實(shí)際上，“最難滅菌”位點(diǎn)就是對(duì)滅菌過程具有最高抗力的位置?？蓞⒖紝ｉT的滅菌標(biāo)

準(zhǔn)（例如：ISO17665-1和ISO11135-1）的指南來確定和選擇“最難滅菌”位置。

5.2.2為了評(píng)估產(chǎn)品上特定位點(diǎn)或位置的滅菌效能，可將特定種類和數(shù)目的試驗(yàn)微生物染菌在那些位

點(diǎn)上。對(duì)采用試驗(yàn)微生物的懸液制備染菌載體或染菌產(chǎn)品需謹(jǐn)慎細(xì)心。試驗(yàn)微生物染菌的材料可改變?cè)?/p>

驗(yàn)微生物的抗力特性?？沽Φ母叩妥兓Q于單層或多層（聚合），涂層效果，和/或材料的抗菌或殺

菌效果。

5.2.3復(fù)蘇試驗(yàn)微生物的方法宜確認(rèn)，用于保證從產(chǎn)品中獲得合適的復(fù)蘇水平。（見ISO11737-1）。

試驗(yàn)微生物回收率宜以原始染菌數(shù)目的百分比來表示。染菌引起的試驗(yàn)微生物的存活特性的變化可影響

觀察到的原始染菌數(shù)目的回收率。采用試驗(yàn)微生物懸液直接在產(chǎn)品或材料上染菌，可導(dǎo)致試驗(yàn)微生物存

活的延長(zhǎng)或縮短?？捎么婊钋€法（計(jì)數(shù)法/直接計(jì)數(shù)法），亦可以用部分陰性法（見圖A.4）對(duì)染菌

產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定。以上操作需使用無菌技術(shù)。

5.2.4D值，如適用，連同z值，只有在特定條件下才是恒定值。由生物指示物制造商和供方提供的

芽孢菌懸液的抗力特性，可能與直接產(chǎn)品染菌研究的抗力特性不一致。采用載體（固體載體材料或液體）

及特定滅菌周期時(shí)需對(duì)抗力特性進(jìn)行測(cè)量。

5.3染菌載體

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5.3.1染菌載體含有規(guī)定數(shù)目的試驗(yàn)微生物，染菌在合適的載體材料上或材料中（見ISO11138-1:2017，

附錄B）。宜注意保證所選載體材料能經(jīng)受滅菌過程，不會(huì)對(duì)其性能特性產(chǎn)生負(fù)面影響，并能減少染菌

試驗(yàn)微生物在運(yùn)輸和裝卸過程中的損失。

5.3.2由于菌懸液要承載在在載體上或者載體中，菌懸液中的試驗(yàn)微生物的抗力特性會(huì)因此發(fā)生相當(dāng)

大的變化。能影響抗力特性變化的因素有好幾種，例如菌懸液所染菌的表面（例如固體載體、粘性產(chǎn)品

或液體），芽孢分布方法，其他處理方法和干燥方法等。

5.3.3若染菌載體是從生物指示物初級(jí)包裝中取出，或在內(nèi)層包裝外增加一層包裝，用于周期開發(fā)、

周期確認(rèn)研究或用于常規(guī)過程監(jiān)測(cè)的過程挑戰(zhàn)裝置，使用者有責(zé)任提供此種應(yīng)用的基本原理。宜考慮到，

染菌載體上微生物抗力可能與標(biāo)簽上所標(biāo)示的生物指示物的抗力有所不同。

5.3.4由生物指示物制造商提供的某種染菌載體的抗力特性，可能與在產(chǎn)品直接染菌研究中得出的抗

力特性不符。

5.3.5宜當(dāng)由生物指示物制造商或使用者采用針對(duì)生物指示物上的載體材料進(jìn)行評(píng)估，以確定擬用生

物指示物的滅菌劑既不會(huì)殘留也不會(huì)釋放出抑制物質(zhì)（例如滅菌劑殘留物），從而抑制少數(shù)微生物的復(fù)

蘇（見ISO11138-1:2017，5.2）

5.4自含式生物指示物

自含式生物指示物包括a）或b）。

a)在外層小瓶?jī)?nèi)裝入一個(gè)有生長(zhǎng)培養(yǎng)基的安瓿和一個(gè)已染菌試驗(yàn)微生物的載體，滅菌因子通過無

菌屏障或一條彎曲的通道才得以接觸染菌載體。

經(jīng)滅菌過程處理后，打破裝有生長(zhǎng)培養(yǎng)基的安瓿，使該生長(zhǎng)培養(yǎng)基接觸染菌載體，從而無需無

菌地將染菌載體轉(zhuǎn)移到單獨(dú)的生長(zhǎng)介質(zhì)容器中。自含式生物指示物的培養(yǎng)宜按生物指示物制造

商的建議。

注1：由于生長(zhǎng)培養(yǎng)基的低容量和蒸發(fā)的可能性，延長(zhǎng)暴露后的培養(yǎng)時(shí)間有時(shí)是不可能的。

從過程中產(chǎn)生的化學(xué)殘留物例如環(huán)氧乙烷或氣態(tài)過氧化氫，可能抑制存活微生物的生長(zhǎng)。在培

養(yǎng)之前宜按生物指示物制造商的建議正確處理生物指示物（包括通風(fēng)）(見8.2.4)。

b)一個(gè)裝有生長(zhǎng)培養(yǎng)基內(nèi)的試驗(yàn)微生物懸液的密封安瓿。

這就是所謂密封安瓿生物指示物。經(jīng)過程暴露后，密封安瓿就原封不動(dòng)的培養(yǎng)，無需無菌轉(zhuǎn)移。

注2：這種類型的生物指示物只對(duì)暴露溫度和暴露時(shí)間敏感，主要用于監(jiān)測(cè)液體的濕熱滅菌。

自含式生物指示物與那些初級(jí)包裝僅含一個(gè)染菌載體的生物指示物相比，體積大，很可能放不

進(jìn)產(chǎn)品中能代表過程挑戰(zhàn)點(diǎn)的位置。如果一種生物指示物不能在不使其變形或可能損害其初級(jí)

包裝的情況下放入負(fù)載物，則宜使用不同的生物指示物。而且，使用者宜意識(shí)到，所要求的抗

力特性可能取決于滅菌周期采用的空氣排除方法。

6供方的選擇

6.1概述

6.1.1生物指示物的使用者宜盡可能作出購(gòu)買決定，確保所選生物指示物符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范。使用者宜將

特定的滅菌過程作為選擇生物指示物的依據(jù)。

6.1.2當(dāng)使用者有一個(gè)過程需要不同于生物指示物標(biāo)簽要求的性能特征時(shí)，使用者有責(zé)任驗(yàn)證生物指

示物是否具有所需的性能特征。

6.1.3生物指示物的使用者宜有一個(gè)系統(tǒng)，以保證所獲得的生物指示物始終符合規(guī)定的特性。這種保

證可以通過以下一個(gè)或者多個(gè)提供：

a)從制造商處獲得包括有關(guān)制備該批生物指示物性能特征的信息；

注：ISO11138規(guī)定了生物指示物制造商提供信息的要求。

b)生產(chǎn)商出具的聲明，聲明其生物指示物符合供方和使用者商定的規(guī)格；

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c)如需要，使用者可對(duì)收到的每批生物指示物進(jìn)行不同程度的檢測(cè)，以驗(yàn)證性能特征是否符合商

定的規(guī)格。

6.1.4當(dāng)使用者對(duì)供方建立了高度的信任時(shí)（見6.1.3），由使用者進(jìn)行的檢測(cè)便可減少到最少。最

低限度，使用者宜建立起一種機(jī)制，可以保證裝運(yùn)來的生物指示物包含商定的所有文件，如適用的標(biāo)簽

信息、插頁(yè)和貯存及運(yùn)輸說明書等。宜有一種機(jī)制，保證供方持續(xù)保持預(yù)期的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如：由供方或

制造商申明符合標(biāo)準(zhǔn)。若使用者沒有與供方建立能保證生物指示物性能不變的關(guān)系，則有必要進(jìn)行附加

試驗(yàn)，直到建立好適當(dāng)?shù)谋ＷC，使得生物指示物滿足BI制造商標(biāo)簽聲稱和/或使用者的要求。(對(duì)于文

件記錄的信息，見附錄D)

6.1.5如認(rèn)為有必要，由使用者進(jìn)行的試驗(yàn)可以包括對(duì)收到的每一批新的生物指示物樣本（亦見8.6

和第11章）進(jìn)行菌數(shù)檢測(cè)和明確的抗力測(cè)試，如：D值或存活與殺滅時(shí)間。測(cè)試宜在制造商規(guī)定的準(zhǔn)

確條件下進(jìn)行。假如生物指示物的制造商是按照詳細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格（即ISO11138）進(jìn)行生產(chǎn)，且使用者

按照制造商擬用的方法使用生物指示物時(shí)，就不必親自進(jìn)行抗力特性的測(cè)試。

制造商標(biāo)簽聲稱的抗力，例如D值，z值（若有）和存活與殺滅結(jié)果采用抗力儀（見ISO18472）進(jìn)

行測(cè)定。

6.2文件

6.2.1概述

6.2.1.1生物指示物標(biāo)簽的要求，見ISO11138-1:2017，4.3的要求。

6.2.1.2標(biāo)簽包括了呈現(xiàn)在生物指示物初級(jí)包裝和次級(jí)包裝上的信息，以及可以印刷在包裝上的信息

以外的其他使用散頁(yè)說明書提供的信息。使用者可能需要或希望將符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)和/或質(zhì)量體系標(biāo)準(zhǔn)的

證據(jù)包括在適當(dāng)?shù)奈臋n文件中。

6.2.1.3當(dāng)制造商提供性能或符合標(biāo)準(zhǔn)的聲明作為證書時(shí)，使用者宜按6.2.2.1第二句所示，確認(rèn)制

造商的能力。

6.2.1.4假如是由一個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室（第三方）來查證生物指示物的性能特征，則該檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

所采用的特定測(cè)試方法宜經(jīng)過認(rèn)可（見ISO/IEC17025和ISO/IEC17011）。

6.2.1.5宜驗(yàn)證生物指示物制造商的狀態(tài)是否符合合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如ISO13485或其他質(zhì)量保證計(jì)

劃。如果能夠證明符合合適的標(biāo)準(zhǔn)，則可能不需要進(jìn)行審核。

6.2.2制造商審核

6.2.2.1若有必要，使用者宜證實(shí)有資格的審核機(jī)構(gòu)，對(duì)生物指示物制造商進(jìn)行了審核?；蛘撸褂?/p>

者可自己進(jìn)行審核。

注：有關(guān)審核的標(biāo)準(zhǔn)ISO19011對(duì)審核過程，質(zhì)量體系審核員的資格和審核計(jì)劃的管理均提出了要求指南。

6.2.2.2由有資格的審核員進(jìn)行審核，這是買方質(zhì)量體系規(guī)定的一部分。對(duì)生物指示物制造商進(jìn)行審

核時(shí)，宜考慮以下內(nèi)容：

a)試驗(yàn)微生物:

1)菌株選擇和保存；

2)試驗(yàn)微生物繁殖條件，包括生長(zhǎng)培養(yǎng)基及各種成份，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間；

3)試驗(yàn)微生物的采集，純度和潔凈度；

4)活的試驗(yàn)微生物計(jì)數(shù)和試驗(yàn)微生物的生物化學(xué)特性。

b)生物指示物:

1)鑒定用于制備生物指示物的成分，如載體材料和初級(jí)包裝，并考慮這些材料對(duì)試驗(yàn)微生物

的任何潛在毒性影響；

2)生物指示物生產(chǎn)過程中試驗(yàn)微生物的數(shù)量；

3)與生物指示物一起提供的生長(zhǎng)培養(yǎng)基的一致性（如生長(zhǎng)促進(jìn)、PH值、穩(wěn)定性等）及裝填

量；

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4)試驗(yàn)微生物抗力，包括測(cè)試設(shè)備類型及其校準(zhǔn)，所采用的復(fù)蘇培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；

5)有效期截止前，試驗(yàn)微生物存放的穩(wěn)定性和持續(xù)抗力。

c)質(zhì)控:

1)生物指示物標(biāo)簽的聲明；

2)生物指示物的存放穩(wěn)定性和持續(xù)符合其標(biāo)簽聲明。

6.2.2.3制造商宜提供充分的、與生產(chǎn)生物指示物相關(guān)的質(zhì)量體系文件，及提供產(chǎn)品符合所申明技術(shù)

規(guī)格的文件。

7過程開發(fā)中的生物指示物

7.1概述

7.1.1對(duì)于過程開發(fā)的附加信息，參考這些過程的滅菌標(biāo)準(zhǔn)（如ISO11135、ISO14937、ISO17665-1

和ISO20857）。

7.1.2如果某個(gè)生物指示物用于過程開發(fā)，該指示物的適應(yīng)性宜確定。

7.1.3滅菌過程因其操作特性和滅菌產(chǎn)品類型而異。雖然每個(gè)應(yīng)用程序都是獨(dú)特的，但為了開發(fā)、確

認(rèn)和常規(guī)監(jiān)視滅菌過程，可以將類似產(chǎn)品分組到同一產(chǎn)品系列中。認(rèn)真考慮被滅菌產(chǎn)品的設(shè)計(jì)或包裝的

各個(gè)方面，這些可對(duì)滅菌過程賦予更多的挑戰(zhàn)。生物指示物可用于確定產(chǎn)品上對(duì)工藝構(gòu)成嚴(yán)格挑戰(zhàn)的位

置，同樣也可用于確定不同類型的產(chǎn)品與滅菌過程挑戰(zhàn)相關(guān)的程度。這可能導(dǎo)致要選擇特殊的產(chǎn)品構(gòu)形

做進(jìn)一步分析。

7.1.4生物指示物宜與合適的物理和/或化學(xué)的過程參數(shù)監(jiān)測(cè)手段配合一起使用，以證明滅菌過程的有

效性。

7.1.5對(duì)于每一種滅菌器的容積該用多少個(gè)生物指示物，無法提出通用性的建議，因?yàn)檫@要取決于周

期重現(xiàn)性和滅菌過程整個(gè)裝載中存在過程參數(shù)差異的可能性。然而，其他滅菌標(biāo)準(zhǔn)可能提供使用生物指

示物的建議數(shù)量，例如：ISO11135?？赏ㄟ^使用生物指示物和/或生物負(fù)載研究收集的數(shù)據(jù)，以及關(guān)于

滅菌劑在整個(gè)裝載中分布的文件，確定要使用的生物指示物的正確數(shù)量。

7.1.6生物指示物/生物負(fù)載組合法的實(shí)施需要考慮5.4和7.2中提到的許多相同因素，關(guān)于生物指示

物在產(chǎn)品和裝載中的位置，這些位置對(duì)滅菌過程構(gòu)成了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。只有當(dāng)數(shù)據(jù)足以進(jìn)行有效的統(tǒng)計(jì)分析，

并且生物負(fù)載數(shù)據(jù)具有很高的可信度，可以代表“最不利條件”時(shí)，該方法才適用。引起變化的原因很

多，如原材料，過程控制和季節(jié)變化。生物負(fù)載在產(chǎn)品中的分布狀態(tài)和存在性質(zhì)宜考慮到。由于生物負(fù)

載在產(chǎn)品中的分布可明顯不同，宜確定分布如何影響到產(chǎn)品對(duì)滅菌過程呈現(xiàn)的挑戰(zhàn)，因而影響到生物指

示物的選擇，這一點(diǎn)極其重要。

產(chǎn)品生物負(fù)載及其種類和抗性分布的測(cè)定需要考慮ISO11737系列中的因素。所選擇的方法宜根

據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行確認(rèn)，并建立生物負(fù)載估計(jì)的統(tǒng)計(jì)置信度。

7.2過度殺滅處理

7.2.1本方法通常是指“半周期法”、“過度殺滅滅菌法”，在ISO14937中有詳細(xì)論述。本方法依

據(jù)下述假設(shè)：

a)生物指示物（參考微生物）比生物負(fù)載更具挑戰(zhàn)性；

b)整個(gè)滅菌過程至少達(dá)到10-6無菌保證水平（見ISO11135-1和ISO14937）；

c)在半周期時(shí)，使用者一般可以證實(shí)至少6個(gè)對(duì)數(shù)減少值（見圖A.1）。

注：ISO11138允許抗力特性，而不是供監(jiān)測(cè)用的最低要求。

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7.2.2這些殺滅標(biāo)準(zhǔn)可能提出，要在整個(gè)裝載的產(chǎn)品PCL處，放置例如含試驗(yàn)微生物總數(shù)為106、符合

最小限度抗力要求的生物指示物或染菌載體。裝載物內(nèi)的這些位置以前宜被證明對(duì)滅菌過程提出了挑

戰(zhàn)，并與“最難滅菌”位置相關(guān)聯(lián)，因此選擇這些位置將確保整個(gè)產(chǎn)品裝載的合適的對(duì)數(shù)減少。當(dāng)所

有生物指示物都是統(tǒng)計(jì)上等效的樣本時(shí)，宜在待驗(yàn)證滅菌過程的正常保持時(shí)間或劑量的一半內(nèi)證明微生

物數(shù)量至少6個(gè)對(duì)數(shù)減少值。顯示生長(zhǎng)的生物指示物百分比可以與所達(dá)到的對(duì)數(shù)減少值相關(guān)聯(lián)[見注

11.3.1c]。如果在半周期條件下進(jìn)行的測(cè)試表明，試驗(yàn)微生物的數(shù)量減少了6個(gè)對(duì)數(shù)值，則根據(jù)樣本

大小，可能不會(huì)導(dǎo)致測(cè)試微生物的生長(zhǎng)。如圖A.1所示，在半周期區(qū)間的上端，芽孢對(duì)數(shù)減少（SLR）

值為8時(shí)，陽(yáng)性生長(zhǎng)的概率為1%。

7.2.3與生物指示物標(biāo)簽上注明的抗力相比，生物指示物放置在產(chǎn)品內(nèi)或裝載內(nèi)可能會(huì)改變其表面抗

力特性。這可能需要調(diào)整半周期暴露時(shí)間，以補(bǔ)償生物指示物在產(chǎn)品或裝載中放置引起的額外抗力。當(dāng)

使用試驗(yàn)菌懸液制備染菌產(chǎn)品時(shí)，可能需要進(jìn)行類似的調(diào)整（見5.2）。

7.2.4宜使用合適的物理測(cè)量來確定整個(gè)裝載中的過程挑戰(zhàn)位置，以幫助確定生物指示物的放置位置。

宜準(zhǔn)備足夠數(shù)量的探頭，并將生物指示物放置在產(chǎn)品內(nèi)先前確定的位置。

注：對(duì)于濕熱滅菌來說，生物指示物的z值未必就是10℃的z值，后者通常假設(shè)以溫度測(cè)量為基礎(chǔ)的過程致死性。這

可能導(dǎo)致使用生物指示物確定的綜合過程致死率與直接溫度測(cè)量確定的致死率之間的差異。

7.3生物指示物和生物負(fù)載組合法

7.3.1生物指示物和生物負(fù)載組合法要求產(chǎn)品生物負(fù)載的總數(shù)和微生物抗力是已知。這種方法的優(yōu)點(diǎn)

是可以縮短周期暴露時(shí)間，并將產(chǎn)品暴露于滅菌劑的程度降至最低，此方法在ISO14937中有詳細(xì)論述。

7.3.2生物指示物/生物負(fù)載組合方法要求選擇能夠提供足以將生物負(fù)載滅活至標(biāo)明的產(chǎn)品無菌保證

水平（SAL）的過程致死率的過程條件。證明合適功效所需的重復(fù)周期數(shù)取決于生物負(fù)載評(píng)估中確定生

物負(fù)載滅活重現(xiàn)性的準(zhǔn)確性和程度。圖A.1顯示了生物指示物失活與產(chǎn)品生物負(fù)載失活之間的一般關(guān)系。

由于生物負(fù)載通常比生物指示物對(duì)殺菌劑的抗性低，因此通?？梢酝ㄟ^比使用過度殺滅方法時(shí)建議的更

少的處理來實(shí)現(xiàn)所需的SAL。

7.3.3對(duì)于這一程序，只要能夠證明所需的SAL，就可以使用每個(gè)載體上的試驗(yàn)微生物數(shù)量少于106

CFU（菌落形成單位）的合適的生物指示物。在確定用于確認(rèn)滅菌過程的最低生物指示物的菌數(shù)，夠證

明所要的無菌保證水平能夠達(dá)到，可采用每個(gè)載體上試驗(yàn)微生物數(shù)量少于106CFU的生物指示物。在確

定滅菌過程確認(rèn)所需最小生物指示物數(shù)量時(shí)，宜考慮生物負(fù)載的變化。生物指示物含菌總數(shù)不宜少于每

個(gè)載體含試驗(yàn)微生物103（見圖A.1）。

7.3.4在ISO11737-1中推薦了測(cè)定產(chǎn)品生物負(fù)載的方法。由于生物負(fù)載變化，有必要對(duì)生物負(fù)載和

生物負(fù)載抗性進(jìn)行常規(guī)表征?？赡苄枰獙?duì)總生物負(fù)載種群的抗力進(jìn)行研究，以確保挑戰(zhàn)小于生物指示物

的挑戰(zhàn)。為此，一種可能采用的方法將是運(yùn)行亞致死滅菌周期，以證實(shí)生物負(fù)載菌落若承受了生物指示

物所承受的暴露，就不能存活。

7.3.5生物指示物和生物負(fù)載組合法的基本準(zhǔn)則要求，所選的加工條件能把生物負(fù)載的總數(shù)降到100。

與產(chǎn)品標(biāo)簽一致的附加安全系數(shù)宜適用于保存期（參見圖A.1）。持續(xù)時(shí)間需外加一個(gè)與產(chǎn)品標(biāo)簽相符

的安全系數(shù)（見圖A.1）。在滅菌周期開發(fā)過程中宜證明重復(fù)周期數(shù)取決于生物負(fù)載估計(jì)的準(zhǔn)確性和置

信區(qū)間。

7.3.6如果微生物菌株的滅菌動(dòng)力學(xué)滿足生物指示物的標(biāo)準(zhǔn)（殺滅曲線對(duì)數(shù)線性的系數(shù)在0.8以內(nèi)），

則其抗力大于產(chǎn)品生物負(fù)載抗力的微生物菌株可以用作生物指示物。大于產(chǎn)品生物負(fù)載抗力的微生物菌

株，如果它們的滅菌活力滿足生物指示物的基本原則，這些菌株可以用作生物指示物。但是，這些指示

物微生物的抗力可能小于ISO11138規(guī)定的過程抗力（見圖A.2）。

7.3.7如果生物負(fù)載的抗力大于市售生物指示物的抗力，則宜考慮將從生物負(fù)載中分離出的抗性菌株

納入過程開發(fā)研究（見ISO11135和ISO17665-1）?；蛘?，宜增加保持時(shí)間或劑量，可根據(jù)由生物負(fù)

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載和生物指示物的相對(duì)抗性所決定的因素，或可以使用具有更高菌數(shù)的生物指示物產(chǎn)生的挑戰(zhàn)大于或等

于抗性菌株。

7.4生物負(fù)載法

7.4.1宜按照ISO11737系列中適合的微生物學(xué)方法來評(píng)估生物負(fù)載。有些生物負(fù)載的抗力可能大于

ISO11138所描述的生物指示物，具有更大抗力的生物負(fù)載微生物可作為模型生物指示物（見7.3）。

此方法在ISO14937中有詳細(xì)論述。

7.4.2特定滅菌過程的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中給出了有關(guān)確認(rèn)和常規(guī)監(jiān)測(cè)以及絕對(duì)生物負(fù)載方法適用性的信息。

對(duì)與生物指示物無關(guān)的完全生物負(fù)載法的詳細(xì)規(guī)定在ISO11737中給出。

8滅菌確認(rèn)的生物指示物

8.1概述

若在確認(rèn)滅菌過程時(shí)使用生物指示物，亦宜考慮到常規(guī)監(jiān)測(cè)中可能使用的生物指示物類型。各類不

同的生物指示物可為滅菌過程提供不同程度的挑戰(zhàn)（見圖A.2）。若在確認(rèn)和常規(guī)監(jiān)測(cè)中使用不同的生

物指示物，宜將兩者都列入確認(rèn)研究中，以便建立并記錄兩者的抗力關(guān)系。

確認(rèn)滅菌過程時(shí)要求提供文件，說明該過程能夠始終如一地生產(chǎn)出符合預(yù)定規(guī)格的產(chǎn)品。（見ISO

11135,ISO14937,IS17665-1,ISO20857）

8.2生物指示物的放置和處理

8.2.1在產(chǎn)品或產(chǎn)品裝載中生物指示物的數(shù)目宜形成文件。

8.2.2使用者宜對(duì)所選的生物指示物在滅菌器的腔室、產(chǎn)品裝載或某個(gè)過程挑戰(zhàn)裝置中的位置形成文

件（見附錄B）。在產(chǎn)品負(fù)載內(nèi)放置生物指示物時(shí)需要考慮的其他因素包括裝載模式、裝載密度和幾何

形狀、PCL、物理和/或化學(xué)傳感器或探針的放置、物理元素的潛在分層、包裝的影響等。

8.2.3過程結(jié)束后，宜立即把生物指示物從滅菌器的裝載中取出，但不宜危及人員安全。宜在對(duì)該產(chǎn)

品和過程已建立的規(guī)定時(shí)間間隔內(nèi)，對(duì)生物指示物進(jìn)行測(cè)試。指示物的準(zhǔn)備及其在滅菌過程中的使用之

間的時(shí)間間隔，和在過程結(jié)束和生物指示物培養(yǎng)之間，宜證明這些間隔沒有對(duì)滅菌器或滅菌過程的生物

指示物測(cè)試結(jié)果的影響。不能超過這些經(jīng)確認(rèn)的時(shí)間間隔。若處理生物指示物的方式不同于制造商的規(guī)

定，宜驗(yàn)證程序，以確定其是否影響生物指示物的性能。宜遵循任何確定的時(shí)間間隔。

8.2.4把生物指示物從滅菌器中取出時(shí)，宜遵守適用的人員安全要求。

8.3滅菌器鑒定

8.3.1進(jìn)行IQ和OQ以獲得書面證明，證實(shí)滅菌器、滅菌器的服務(wù)和輔助設(shè)備按招其規(guī)范提供和安裝，

并且滅菌器按使用說明書操作，能在預(yù)定范圍內(nèi)運(yùn)行（見ISO11135，ISO17665-1和ISO20857）。

在OQ或PQ中可使用生物指示物，例如用于證實(shí)滅菌劑分布的均勻性。

8.3.2滅菌器制造商可能已為特定類型裝載（見附錄B）使用生物指示物進(jìn)行過型式測(cè)試。

8.4性能鑒定

滅菌器鑒定（見8.3）完成后，隨即進(jìn)行性能鑒定（PQ）測(cè)試，將滅菌過程的重現(xiàn)性和有效性形成

文件，包括其可生產(chǎn)出符合預(yù)定質(zhì)量規(guī)格產(chǎn)品的能力。確認(rèn)建立的過程符合預(yù)定規(guī)范?？刹捎孟鄳?yīng)的

標(biāo)準(zhǔn)，例如ISO11135，ISO14937，ISO17665-1和ISO20857。各類不同的生物指示物可為滅菌過程提

供不同程度的挑戰(zhàn)（見圖A.2）。對(duì)滅菌周期的開發(fā)和確認(rèn)，以及常規(guī)監(jiān)測(cè)中所用的生物指示物間的關(guān)

聯(lián)宜予以建立，并形成文件。

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8.5確認(rèn)的審核和批準(zhǔn)

順利完成各項(xiàng)鑒定后，開始投入生產(chǎn)之前必須審核確認(rèn)文件，包括生物指示物的性能，以驗(yàn)證滅菌

過程是否符合要求。

8.6再鑒定

8.6.1進(jìn)行再鑒定時(shí)，所采用的抗力特性，生物指示物的數(shù)目，在產(chǎn)品裝載中的位點(diǎn)等，均宜與原來

一樣。若過程采用的是經(jīng)確認(rèn)過的新的生物指示物，則需建立和將新的生物指示物與原來的指示物的相

互關(guān)系形成文件，這一點(diǎn)極為重要。

8.6.2采用濕熱和環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，ISO17665-1或ISO11135-1適用。

8.6.3宜建立評(píng)估批生物指示物抗力特性的最低頻率?？砂鸭竟?jié)變化、產(chǎn)品和材料的變化和設(shè)備的變

更等因素都考慮到，這些情況會(huì)影響再次鑒定生物指示物時(shí)采用不同的時(shí)間間隔。若生物指示物的抗力

特性變化超過預(yù)定的極限，則宜進(jìn)行再鑒定。若復(fù)蘇培養(yǎng)基改變，則新的生長(zhǎng)培養(yǎng)基宜與先前采用的生

長(zhǎng)培養(yǎng)基相關(guān)聯(lián)，而且，選用新的生長(zhǎng)培養(yǎng)基宜經(jīng)確認(rèn)（亦見12.4）。

注：如從合格供應(yīng)商處購(gòu)買生物指示物，其抗力特性，如按標(biāo)簽所示進(jìn)行儲(chǔ)存，可在標(biāo)示的有效期內(nèi)維持在規(guī)定公差內(nèi)（ISO

11138-1）。

9常規(guī)監(jiān)測(cè)中的生物指示物

9.1概述

9.1.1生物指示物提供了證實(shí)滅菌過程微生物致死性的一種方法，然而，為了定量評(píng)估致死率，在滅

菌確認(rèn)中可是實(shí)施部分陰性法（如：半周期法）。對(duì)于開發(fā)完善、經(jīng)過確認(rèn)的過程，可能可使用參數(shù)放

行（例如：環(huán)氧乙烷滅菌見ISO11135或干熱滅菌見ISO20857），但當(dāng)?shù)乇O(jiān)管機(jī)構(gòu)也可能要求使用生

物指示物作為過程監(jiān)控和批放行的一部分。對(duì)于不能可靠測(cè)量過程變量，因此批參數(shù)放行無法實(shí)現(xiàn)的過

程，生物指示物為證明滅菌過程中微生物的致死性提供了最佳替代方案。環(huán)氧乙烷見ISO11135，干熱

見ISO20857。

9.1.2生物指示物的類型及其在產(chǎn)品或產(chǎn)品裝載中的位置，宜與滅菌過程開發(fā)或確認(rèn)中已確定的產(chǎn)品

裝載位置相一致。若用于滅菌過程常規(guī)監(jiān)測(cè)的微生物挑戰(zhàn)系統(tǒng)與用于確認(rèn)過程的微生物挑戰(zhàn)不同，確認(rèn)

系統(tǒng)和日常監(jiān)控系統(tǒng)之間的關(guān)系宜形成文件。

9.1.3準(zhǔn)備生物指示物和滅菌之間的規(guī)定的時(shí)間間隔，以及過程結(jié)束和指示物培養(yǎng)之間規(guī)定的時(shí)間間

隔宜是合理的，以證明這些間隔對(duì)生物指示物的性能沒有影響（見8.2.3）。

9.1.4用于生物指示物/生物負(fù)載組合法中常規(guī)監(jiān)測(cè)所用的生物指示物（見7.3），如果菌數(shù)和/或抗

力低于各部分的最低要求時(shí)（見ISO11138-1:2017，6.1.3），可不必與ISO11138全部相符。

9.2生物指示物的放置和處理

9.2.1在周期開發(fā)和確認(rèn)時(shí)，生物指示物在產(chǎn)品和裝載中的放置位置，宜是對(duì)滅菌過程最嚴(yán)格挑戰(zhàn)的

地方。在常規(guī)監(jiān)測(cè)中，使用一個(gè)PCD將生物指示物放在更便捷的位置是可取的（見9.3）。在這些情況

下，生物指示物的放置宜與周期設(shè)定時(shí)采用的位置相關(guān)聯(lián)，以保證滅菌過程的完整性不受影響。還宜保

證常規(guī)監(jiān)測(cè)采用的生物指示物的放置位置始終如一。

9.2.2滅菌后生物指示物的妥善處理宜遵照生物指示物供應(yīng)商的指示。通常，宜在不影響人員安全的

情況下，在合理的規(guī)定時(shí)間內(nèi)，從負(fù)載上取出生物指示物（見第11章）。然后，宜在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)通

過無菌技術(shù)把生物指示物轉(zhuǎn)種到合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基上，并在恰當(dāng)?shù)臏囟认逻M(jìn)行培養(yǎng)（見第12章）。如

使用自含式生物指示物，則無需采用無菌技術(shù)。

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9.2.3除了對(duì)培養(yǎng)基的生長(zhǎng)促進(jìn)和生物指示物的活性鑒定要求外，使用者在滅菌過程的常規(guī)監(jiān)測(cè)中也

可以簡(jiǎn)化的實(shí)施這些檢查。對(duì)生物指示物的這些特性進(jìn)行簡(jiǎn)化的檢查，例如，可采用未經(jīng)滅菌處理的生

物指示物放在培養(yǎng)集中培養(yǎng)，以顯示生物指示物活力和生長(zhǎng)條件適用性兩方面的情況。

注：國(guó)家指南文件可對(duì)未暴露的控制因素的使用進(jìn)行要求。

9.2.4只有當(dāng)需要的物理和/或化學(xué)參數(shù)經(jīng)過審核，微生物學(xué)結(jié)果得到解釋，而且兩者均符合所需指標(biāo)，

滅菌過程才可以接受。。

9.3過程挑戰(zhàn)裝置（PCD）

9.3.1過程挑戰(zhàn)裝置與生物指示物組合用于滅菌周期的確認(rèn)和常規(guī)監(jiān)測(cè)。過程挑戰(zhàn)裝置可設(shè)計(jì)成讓生

物指示物放在過程挑戰(zhàn)裝置中的適當(dāng)嚴(yán)格挑戰(zhàn)的位置。過程挑戰(zhàn)裝置的設(shè)計(jì)可根據(jù)被挑戰(zhàn)產(chǎn)品性質(zhì)而變

化（見附錄B給出的各種不同過程挑戰(zhàn)裝置示例）。

9.3.2過程挑戰(zhàn)裝置的設(shè)計(jì)宜考慮影響滅菌過程的各種工藝參數(shù)。過程挑戰(zhàn)裝置的構(gòu)成要取決于被監(jiān)

測(cè)的周期類型，以及被滅菌產(chǎn)品的類型。

9.3.3過程挑戰(zhàn)裝置可以是市售的預(yù)制器件，通常叫做“生物測(cè)試包”。過程挑戰(zhàn)裝置及在產(chǎn)品裝載

中的位置宜代表對(duì)過程的挑戰(zhàn)，相當(dāng)于或者超過產(chǎn)品裝載所代表的挑戰(zhàn)。

10解釋和接受標(biāo)準(zhǔn)

10.1概述

10.1.1通過使用相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行滅菌過程的確認(rèn)和控制，在滅菌過程開發(fā)期間確定滅菌過程合格的驗(yàn)收

標(biāo)準(zhǔn)，

10.1.2為了取得可靠的結(jié)果，宜建立并維護(hù)常規(guī)程序，并由訓(xùn)練有素的技術(shù)人員使用合適的設(shè)備實(shí)施。

10.2結(jié)果解釋

10.2.1一個(gè)經(jīng)過確認(rèn)、符合各項(xiàng)預(yù)設(shè)參數(shù)的滅菌