絕密★啟用前云南省永善一中20172018學年下學期期中考試高二生物命題教師：審題教師：本試卷分第Ⅰ卷和第Ⅱ卷兩部分，共100分，考試時間90分鐘。學校：___________姓名：___________班級：___________考號：___________分卷I一、單選題(共20小題,每小題2.0分,共40分)1.如圖是單克隆抗體制備過程示意圖，其中1過程注射的物質(zhì)和A細胞的名稱分別是()A．抗體、T淋巴細胞B．抗原、T淋巴細胞C．抗體、B淋巴細胞D．抗原、B淋巴細胞2.下列說法錯誤的是()A．科學家通過對胰島素的改造，已經(jīng)使其成為速效型藥品B．我們可以將蛋白質(zhì)工程應(yīng)用于微電子方面C．用蛋白質(zhì)工程方法制成的電子元件具有體積小，耗電少和效率高的特點D．蛋白質(zhì)工程成功的例子不多，主要是因為蛋白質(zhì)種類太少，原料不足3.與傳統(tǒng)育種相比，植物體細胞雜交在培育作物新品種方面的重大突破表現(xiàn)在()A．證明雜種細胞具有全能性B．克服遠緣雜交不親和的障礙C．縮短育種周期，減少盲目性D．快速培育無病毒植株，保留雜種優(yōu)勢4.基因工程與蛋白質(zhì)工程的區(qū)別是()A．基因工程需對基因進行分子水平操作，蛋白質(zhì)工程不對基因進行操作B．基因工程合成的是天然存在的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)工程合成的可以不是天然存在的蛋白質(zhì)C．基因工程是分子水平操作，蛋白質(zhì)工程是細胞水平(或性狀水平)的操作D．基因工程完全不同于蛋白質(zhì)工程5.植物體細胞雜交可以解決不同生物之間的________問題()A．親緣關(guān)系遠B．生殖隔離C．地理隔離D．組織分化6.2009年春末，甲型H1N1流感病毒成為全人類共同的敵人。某生物工程公司擬利用細胞工程方法，以甲型H1N1病毒衣殼蛋白為抗原制備單克隆抗體。相關(guān)敘述正確的是()A．將純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血淸抗體為單克隆抗體B．體外培養(yǎng)單個漿細胞還可以獲得大量針對甲型H1N1病毒的淋巴因子C．將等量漿細胞和骨髄瘤細胞混合，經(jīng)PEG誘導融合后的細胞均為雜交瘤細胞D．利用該單克隆抗體與甲型H1N1病毒衣殼蛋白特異性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者7.下列關(guān)于cDNA文庫和基因組文庫的說法中，不正確的是()A．cDNA文庫中的DNA來源于mRNA的反轉(zhuǎn)錄過程B．如果某種生物的cDNA文庫中的某個基因與該生物的基因組文庫中的某個基因控制的性狀相同，則這兩個基因的結(jié)構(gòu)也完全相同C．cDNA文庫中的基因都沒有啟動子D．一種生物的cDNA文庫可以有許多種，但基因組文庫只有一種8.判斷下列有關(guān)基因工程和酶的相關(guān)敘述，正確的是()A．限制酶不能切割煙草花葉病毒的核酸B．載體的化學本質(zhì)與載體蛋白相同C．同種限制酶既可以切割目的基因又可以切割質(zhì)粒，因此不具備專一性D．DNA連接酶可催化脫氧核苷酸鏈間形成氫鍵9.既可進行胚胎性別鑒定，又能進行胚胎移植的最佳示意圖是()A．B．C．D．10.下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因生物的研究，哪些屬于限制條件()①重組DNA的轉(zhuǎn)移限制在遺傳上具有特定缺陷的生物上②對于大腸桿菌作為轉(zhuǎn)基因受體的菌株，限定必須使用在37℃人體體溫下死亡的菌株③外源DNA不能產(chǎn)生對人體有毒害或過敏的蛋白質(zhì)④轉(zhuǎn)基因作物只要某一點(如產(chǎn)量、營養(yǎng)或抗蟲性)對人類有益，其他方面可不必去考慮A．①②③④B．①②③C．②③④D．①②④11.2003年7月，我國衛(wèi)生部在《體外受精—胚胎移植及其衍生技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定，“實施體外受精—胚胎移植及其衍生技術(shù)必須獲得衛(wèi)生部的批準證書”。下列對這句話的理解中，正確的是()A．我國不允許進行植入前胚胎遺傳學診斷B．我國不贊成進行試管嬰兒C．進行試管嬰兒和設(shè)計試管嬰兒必須得到國家批準D．我國不支持試管嬰兒和設(shè)計試管嬰兒研究12.下列哪些屬于濕地生態(tài)系統(tǒng)的生態(tài)效益()①蓄洪防旱，調(diào)節(jié)區(qū)域氣候②控制土壤侵蝕，自然凈化污水③鳥類的棲息地④工業(yè)用水的來源A．①②B．②③C．①②③D．①②③④13.某生物小組考查一農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)中水稻從播種到稻稈還田的全過程。在稻田分蘗期間，農(nóng)民拔草、治蟲；然后排水進行擱田(亦稱“烤田”)；稻谷收獲之后，有不少農(nóng)民在田里焚燒稻稈。下列敘述中，不正確的是()A．農(nóng)民拔草、治蟲的目的是使能量較多地流向水稻B．擱田時排出的水可能對水體造成污染C．擱田有利于水稻根系生長，提高水稻抗倒伏能力D．焚燒稻稈可促進物質(zhì)循環(huán)，實現(xiàn)能量高效利用14.下圖為受精作用及胚胎發(fā)育示意圖，a、b代表兩個發(fā)育時期，下列敘述不正確的是()A．①過程發(fā)生同源染色體分離B．②過程通過有絲分裂增殖C．a(chǎn)時期可分離得到胚胎干細胞D．①→④細胞分化程度逐漸增大15.關(guān)于早期胚胎培養(yǎng)的說法，不正確的是()A．發(fā)育培養(yǎng)液的成分通常含有血清B．發(fā)育培養(yǎng)液的成分較一般動物細胞培養(yǎng)液的成分簡單C．動物種類不同，進行胚胎移植的早期胚胎所處階段不同D．進行胚胎移植之前，可將培養(yǎng)到適宜時期的早期胚胎進行保存16.野生或經(jīng)濟動物收集精子的方法多用()A．假陰道法B．手握法C．電刺激法D．化學誘導法17.下圖表示哺乳動物胚胎發(fā)育過程的幾個階段，下列相關(guān)描述正確的是()A．圖中3是透明帶，7是原腸腔B．發(fā)育的先后順序是甲→丙→乙C．1部位細胞將來發(fā)育成胎兒的各種組織D．甲、乙、丙時期的細胞都具有發(fā)育的全能性18.下列關(guān)于哺乳動物胚胎發(fā)育和胚胎工程的敘述，正確的是()A．卵裂期胚胎中細胞數(shù)目和有機物總量在不斷增加B．胚胎分割時需將原腸胚的內(nèi)細胞團均等分割C．胚胎干細胞具有細胞核大、核仁小和蛋白質(zhì)合成旺盛等特點D．胚胎干細胞在體外誘導分化可培育某些組織細胞用于治療人類組織損傷和某些頑癥19.轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題主要包括()①食物安全②生物安全③環(huán)境安全④社會安全A．①②③B．②③④C．①②④D．①②③④20.70年代基因工程技術(shù)剛興起的時候，都以微生物作為實驗材料，且必須在“負壓”(低于外界大氣壓)的實驗室里操作。這里“負壓”的作用主要是()A．防止重組基因的生物進入人體或逃逸到外界，從而對環(huán)境造成基因污染B．提高微生物的基因突變頻率C．加快微生物的繁殖速度D．避免其他微生物對實驗材料的污染分卷II二、非選擇題(共5小題共60分)21（10分）.近期《肝臟學》雜志發(fā)表了一篇文章稱科學家經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)：乙肝病毒HBX蛋白質(zhì)調(diào)控宿主細胞內(nèi)許多基因的轉(zhuǎn)錄，廣泛影響宿主細胞的各種生命活動，包括調(diào)節(jié)細胞凋亡、抑制細胞DNA的修復、干擾細胞有絲分裂和細胞周期進程等，因此可利用該蛋白質(zhì)治療乙肝。下圖表示利用乳腺反應(yīng)器生產(chǎn)乙肝病毒HBX蛋白的流程示意圖：(1)已知HBX蛋白基因的核苷酸序列，則①可采用________獲得目的基因，并用________技術(shù)進行擴增。(2)為獲得更高活性的HBX蛋白質(zhì)，需要對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)進行設(shè)計改造，但必須通過基因修飾或基因合成來完成，而不直接改造蛋白質(zhì)的原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)圖中載體④是________，⑥為胚胎移植到受體，在該步驟操作前對胚胎進行了檢查和篩選，發(fā)現(xiàn)有些胚胎因為外源基因的插入而死亡，請你分析外源基因插入導致胚胎死亡的原因_________________________________________________________________________________________________________________________________。22（14分）.質(zhì)粒能成功轉(zhuǎn)入植物細胞，并將質(zhì)粒上的一部分外源DNA整合到植物的DNA中。下圖表示利用質(zhì)粒進行轉(zhuǎn)化獲得抗除草劑大豆的過程。請據(jù)圖分析回答：(1)過程②需要通過________使質(zhì)粒與目的基因的切口黏合。(2)組建理想的載體需要對天然的質(zhì)粒進行改造。下圖是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖(圖示為部分基因及部分限制性核酸內(nèi)切酶的作用位點)，據(jù)圖分析：①人工改造時，要使抗蟲基因表達，還應(yīng)插入________。②人工改造時，用限制酶Ⅱ處理，其目的是：第一，去除質(zhì)粒上的________(基因)，保證T-DNA進入植物細胞后不會引起細胞的無限分裂和生長；第二，使質(zhì)粒帶有單一限制酶作用位點，有利于________________________；第三，使質(zhì)粒大小合適，可以提高轉(zhuǎn)化效率等。③若用限制酶Ⅰ分別切割改造過的理想質(zhì)粒和帶有抗除草劑基因的DNA分子，并構(gòu)建成重組Ti質(zhì)粒。分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)已成功導入抗蟲基因的植物細胞，觀察到的細胞生長的現(xiàn)象是__________________________________________________________________________________________________________________。(3)若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端為序列，則該酶識別的核苷酸序列是________。(4)過程③可以采用的方法是_____________________________________________________________________________________________________________________________。(5)為了檢測通過過程④獲得的幼苗是否具有抗除草劑的特性，可采用的方法是______________________________________________________________________________________________________________________________________。23（12分）.基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細胞技術(shù)的基礎(chǔ)上而發(fā)展起來的一種分子生物學技術(shù)。結(jié)合圖示回答下列問題：注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表達可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導致細胞死亡。(1)將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到________上，構(gòu)建打靶載體(基因表達載體)。(2)打靶載體測序驗證正確后，利用________酶，將之線性化，以提高重組率。通過________技術(shù)導入胚胎干細胞，這樣打靶載體與細胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。(3)為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入________________。最后還需要通過________技術(shù)鑒定同源重組的細胞(去除靶基因)，將這樣的細胞通過________培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細胞。其中，暫時不用的細胞進行液氮(或冷凍)保存。(4)將打靶成功的細胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、________的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行________檢查，確保其生下嵌合小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的________(選填“體細胞”、“生殖細胞”)恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。24（12分）.如圖是畜牧業(yè)生產(chǎn)上培育某種優(yōu)良種牛的兩種方法，請分析回答：(1)方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的主要生物技術(shù)有________和________。(2)用激素處理的目的是使B牛________，從B牛體內(nèi)獲得的卵母細胞需要培養(yǎng)到________(時期)才能與精子結(jié)合。(3)A牛的精子必須在B牛的生殖道中經(jīng)過相應(yīng)的生理變化后，才能與B牛的卵細胞結(jié)合，完成受精作用，這個過程叫做________。卵子受精的標志是在卵黃膜和透明帶的間隙能夠觀察到________。(4)生產(chǎn)上常用________期的胚胎進行胚胎移植。若希望同時獲得多個性狀相同的家畜個體，可以使用________技術(shù)。25.閱讀下面的文章，回答下列問題。美國公平就業(yè)機會委員會近日將美國北圣菲鐵路公司告上法庭，要求這家公司停止對其雇員進行基因缺陷檢測。這是美國首例與工作場所基因隱私和基因歧視有關(guān)的法律糾紛案。據(jù)報道，公平就業(yè)機會委員會在訴訟狀中說，北圣菲鐵路公司從部分雇員身上采集血樣，然后進行基因缺陷檢測，這種把基因檢測結(jié)果作為雇用依據(jù)的做法違反了美國殘疾人法案，應(yīng)立即禁止。該委員會在一份聲明中說：“在科學和技術(shù)進步的同時，我們必須保持警惕，確保新科技成果不被用于違反勞動者權(quán)利。”由于擔心基因檢測將使一些體質(zhì)差、易受傷或患病的人不被用人單位雇用，美國22個州已經(jīng)通過了禁止在雇人時借助基因檢測做決定的法案。(1)文章中的基因缺陷是指____________________________________________________。(2)導致基因缺陷的因素有________、________和________等。(3)對缺陷基因可以采取________方法進行治療。(4)美國公平就業(yè)機會委員會為什么要狀告北圣菲鐵路公司？這則案例給我們什么啟示？答案解析1.【答案】D【解析】單克隆抗體技術(shù)首先應(yīng)該獲得能產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞，所以應(yīng)該向小鼠注射單一抗原，刺激小鼠產(chǎn)生相應(yīng)的B淋巴細胞，由B淋巴細胞產(chǎn)生單一抗體。然后利用動物細胞融合技術(shù)使B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合獲得雜交瘤細胞。然后在體外進行培養(yǎng)或在體內(nèi)培養(yǎng)獲得大量的單一抗體。2.【答案】D【解析】蛋白質(zhì)工程是一項難度很大的工程，目前成功的例子不多，主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的高級結(jié)構(gòu)，這種高級結(jié)構(gòu)十分復雜，目前科學家對大多數(shù)蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu)的了解還很不夠，這就制約了其發(fā)展。蛋白質(zhì)的種類是非常繁多的，原料也是十分的充足。3.【答案】B【解析】植物體細胞雜交的本質(zhì)是直接讓來源不同的植物細胞相互融合，這兩種細胞可以沒有任何親緣關(guān)系，也就是說此技術(shù)解決了遠緣雜交不親和的障礙，跨越了生殖隔離。4.【答案】B【解析】蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程，是從分子水平對蛋白質(zhì)進行改造設(shè)計，直接對相應(yīng)的基因進行修飾加工甚至人工進行基因合成，從而對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類生產(chǎn)和生活的需求，而基因工程只是將外源基因?qū)肓硪簧矬w內(nèi)，并使之表達，體現(xiàn)人類所需的性狀，或者獲取所需的產(chǎn)品，因此，基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)。5.【答案】B【解析】由于不同物種之間存在著生殖隔離，因此有性雜交無法實現(xiàn)遠源雜交，采用植物體細胞雜交就可以避免遠源雜交的不親和性。6.【答案】D【解析】單克隆抗體是漿細胞與骨髓瘤細胞融合形成的雜交瘤細胞分泌的，將純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內(nèi)，產(chǎn)生的血清抗體不止一種，A錯誤；單獨的效應(yīng)B淋巴細胞有產(chǎn)生抗體的能力，但沒有無限增殖的本領(lǐng)，因此在體外培養(yǎng)的情況下是不可能得到大量的單克隆抗體的，再有漿細胞不分泌淋巴因子，B錯誤；將等量漿細胞和骨髓瘤細胞混合，經(jīng)PEG誘導融合后的細胞有漿細胞自身融合細胞、骨髓瘤細胞自身融合細胞和雜交瘤細胞三種，C錯誤；單克隆抗體具有特異性強、靈敏度高的特點，因此利用該單克隆抗體與SARS病毒核衣殼蛋白特異性結(jié)合的方法可診斷出病毒感染者，D正確。7.【答案】B【解析】cDNA文庫中的DNA來源于mRNA的反轉(zhuǎn)錄過程，所以該DNA(或基因)與該生物體內(nèi)的原DNA在結(jié)構(gòu)上是有區(qū)別的，如不含有啟動子等。8.【答案】A【解析】一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切點上切割DNA分子，因此具有專一性；載體有質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒等，成分不單一，載體蛋白本質(zhì)是蛋白質(zhì)；煙草花葉病毒的核酸為RNA，限制酶不能切割；DNA連接酶可催化黏性末端黏合后的磷酸二酯鍵形成。9.【答案】A【解析】胚胎移植一般選擇桑椹胚或囊胚期的胚胎進行。進行性別鑒定時，所取組織不能來自內(nèi)細胞團，否則會影響胚胎發(fā)育，應(yīng)選用滋養(yǎng)層細胞。分析題圖：A和B都表示囊胚期，可以進行胚胎移植，也可以進行胚胎分割，其中A既可以進行胚胎性別鑒定，又能進行胚胎移植；B只能進行胚胎移植．C和D都是原腸胚，不適宜進行胚胎移植。所以只有A圖(囊胚期)符合。故選A。10.【答案】B【解析】11.【答案】C【解析】我國允許進行試管嬰兒和設(shè)計試管嬰兒，但是，必須得到國家批準。12.【答案】C【解析】濕地被譽為地球的“腎臟”，具有蓄洪防旱、調(diào)節(jié)區(qū)域氣候、控制土壤侵蝕、自然凈化污水、為遷飛的鳥類和多種動植物提供棲息地及為人們提供休閑娛樂的環(huán)境等功能。13.【答案】D【解析】除草、滅蟲的目的是合理調(diào)整生態(tài)系統(tǒng)的能量流動方向，使能量更多地流向?qū)θ祟愖钣幸娴霓r(nóng)作物——水稻中。焚燒稻稈使稻稈中的能量大多以熱能散失掉了，浪費資源的同時還污染了環(huán)境。14.【答案】A【解析】精子和卵細胞的結(jié)合過程，不存在同源染色體的分離，A錯誤；②過程是受精卵的卵裂，是通過有絲分裂增殖，B正確；a時期為囊胚期，其中的內(nèi)細胞團可分離得到胚胎干細胞，C正確；①→④過程是受精作用及胚胎發(fā)育，細胞分化程度逐漸增大，D正確。15.【答案】B【解析】哺乳動物胚胎的發(fā)育培養(yǎng)液成分一般都比較復雜，除一些無機鹽和有機鹽類外，還含有維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及血清等物質(zhì)，因此進行胚胎早期培養(yǎng)的發(fā)育培養(yǎng)液成分較動物細胞培養(yǎng)液成分復雜；不同動物胚胎移植的時期不同，如牛、羊一般培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚階段，小鼠和小兔可在更早階段移植。16.【答案】C【解析】收集精子時，大型動物常用假陰道法；體型較小，易控制的動物常用手握法；野生或經(jīng)濟動物多用電刺激法；而化學誘導法是精子獲能的處理方法。17.【答案】A【解析】圖中甲是桑椹胚，乙是囊胚，丙是原腸胚。圖中1是滋養(yǎng)層，2是內(nèi)細胞團，3是透明帶，4是囊胚腔，5是外胚層，6是滋養(yǎng)層，7是原腸腔，8是內(nèi)胚層。內(nèi)細胞團將來發(fā)育成胎兒的各種組織，滋養(yǎng)層細胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤。18.【答案】D【解析】卵裂期時，細胞的數(shù)目增加，但有機物的總量在減少，故A錯誤；胚胎分割時，通常將囊胚或桑椹胚的內(nèi)細胞團均等分割，故B錯誤；胚胎干細胞的特點是細胞核大、核仁明顯，故C錯誤；胚胎干細胞在體外添加分化誘導因子時可以分化形成某些組織，有利于疾病的治療，故D正確。19.【答案】A【解析】轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題主要包括食物安全、生物安全和環(huán)境安全三個方面。20.【答案】A【解析】由于轉(zhuǎn)基因生物對人類的影響的正負效應(yīng)很難在短時間內(nèi)發(fā)現(xiàn)，為了安全起見，將實驗材料放在負壓條件下操作與培養(yǎng)，目的是即使這種轉(zhuǎn)基因生物進入人體或逃逸到外界，也會因大氣壓強過大，而無法存活，從而避免造成基因污染。21.【答案】(1)人工合成法PCR(2)改造基因易于操作且改造后能夠遺傳(3)動物病毒外源基因的插入導致胚胎正常發(fā)育所需的基因不能表達【解析】已知核苷酸序列的基因，可采用人工合成法進行合成從而獲得目的基因，然后利用PCR技術(shù)進行擴增；改造蛋白質(zhì)不能遺傳，而改造基因則可以遺傳，因此改造蛋白質(zhì)需要通過改造基因來實現(xiàn)；培育轉(zhuǎn)基因動物利用的載體是動物病毒；外源基因插入到羊的DNA中，則可能會影響到其他基因的表達，如果插入后影響了使羊胚胎發(fā)育所需要的基因的表達，就會導致胚胎死亡。22.【答案】(1)DNA連接酶(2)①啟動子②tms和tmr目的基因準確插入③在含卡那霉素和新霉素的培養(yǎng)基中能夠生長，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長(3)(4)花粉管通道法(或農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法，答一項即可)(5)對幼苗噴施除草劑，觀察其生長情況【解析】(1)圖中②是構(gòu)建基因表達載體，需要使用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來。(2)由圖可知，該表達載體中沒有啟動子。用限制酶Ⅱ處理，可將tms基因與tmr基因切除，這兩個基因與細胞的分裂和生長有關(guān)。用限制酶Ⅰ切割時，tetR(四環(huán)素抗性基因)被破壞，而neor(卡那霉素和新霉素抗性基因)完整，因此不能在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，而能在含卡那霉素和新霉素的培養(yǎng)基上生長。23.【答案】(1)載體(或質(zhì)粒)(2)限制顯微注射(3)新霉素和丙氧鳥苷DNA分子雜交動物細胞(或克隆)(4)生理狀態(tài)相同(或經(jīng)同期發(fā)情)妊娠生殖細胞【解析】(1)構(gòu)建打靶載體(基因表達載體)，需要將目的基因和與細胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到載體(或質(zhì)粒)上。(2)將環(huán)狀的打靶載體線性化，需利用限制酶進行切割，通過顯微注射技術(shù)將其導入胚胎干細胞。(3)在同源重組時，tk基因?qū)⒈磺谐鴣G失，但新霉素抗性基因得以保留且結(jié)構(gòu)完整，所以為了篩選發(fā)生同源重組的細胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷。鑒定去除靶基因的同源重組的細胞，可通過DNA