原果膠伽)檢測(cè)試劑盒(咔唑比色法)簡(jiǎn)介：天然果膠類物質(zhì)以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實(shí)、根、莖、葉中，是細(xì)胞壁的一種組成成分，它們伴隨纖維素而存在，構(gòu)成相鄰細(xì)胞中間層粘結(jié)物，使植物組織細(xì)胞緊緊黏結(jié)在一起。原果膠是不溶于水的物質(zhì)，但可在酸、堿、鹽等化學(xué)試劑及酶的作用下，加水分解轉(zhuǎn)變成水溶性果膠。果膠Pectin)又稱多聚半乳糖醛酸，是由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷鍵連接形成的直鏈狀聚合物，本質(zhì)上是一種線形的多糖聚合物，含有數(shù)百個(gè)脫水半乳糖醛酸殘基。原果膠是一種非水溶性的物質(zhì)，在未成熟的果實(shí)或植物組織中果膠物質(zhì)大多與纖維素結(jié)合以原果膠的形式存在，原果膠能使果實(shí)或其他植物組織堅(jiān)硬、變脆。Leagene原果膠(PP)檢測(cè)試劑盒(咔唑比色法)檢測(cè)原理是果膠物質(zhì)水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中咔唑進(jìn)行縮合反應(yīng)形成紫紅色的化合物，該化合物呈色強(qiáng)度與半乳糖醛酸濃度成正比，該化合物顏色在反應(yīng)內(nèi)呈色最深，當(dāng)反應(yīng)液顏色最深時(shí)在波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出樣品中原果膠或可溶性果膠含量。該試劑盒主要用于定量檢測(cè)植物組織或果實(shí)中原果膠含量，亦可用于定量檢測(cè)植物組織或果實(shí)中可溶性果膠含量，進(jìn)而計(jì)算出總果膠含量(為原果膠含量與可溶性果膠含量之和)。該25T試劑盒可以檢測(cè)25-30左右個(gè)樣本。該試盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成：----------一一 編號(hào)名稱TC212325TStorage試劑(A):果膠標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)1ml4°C避光試劑(B):SPLysisbuffer2x500mlRT試劑(C):PPLysisbuffer100mlRT使用說(shuō)明書(shū)1份自備材料：

1、 蒸餾水2、 濃硫酸3、 實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋(píng)果、杏等果實(shí)或其他植物組織4、 研缽或勻漿器5、 試管6、 離心機(jī)7、 水浴鍋8、 比色杯9、 分光光度計(jì)操作步驟(僅供參考):1、 可溶性及原果膠提取：①取果實(shí)或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品，置于研缽或勻漿器。?加入SPLysisbuffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入試管中。用SPLysisbuffer沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)移至試管中，補(bǔ)加SPLysisbuffer。沸水浴，在煮沸過(guò)程中及時(shí)補(bǔ)加SPLysisbuffer，取出冷卻至室溫，離心，棄上清液。重復(fù)該步驟，以去除樣品中的糖分以及其他物質(zhì)。取含有沉淀的試管，加入蒸餾水，水浴以溶解果膠。取出冷卻至室溫，離心，將上清液轉(zhuǎn)移至新試管中。用少量蒸餾水洗滌沉淀，離心，一并將上清液轉(zhuǎn)移至上述新試管中，加蒸餾水定容，即為可溶性果膠提取液。取上述可溶性果膠提取液，離心，棄上清液，向離心管中加APPLysisbuffer，沸水浴,取出冷卻至室溫，離心，加蒸餾水定容，即為原果膠提取液。2、 稀釋果膠標(biāo)準(zhǔn)溶液：取適量的果膠標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)，按下表進(jìn)行稀釋：加入物(ml)12345果膠標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)0.010.020.030.040.05蒸餾水0.490.480.470.460.45果膠含量(ug)10203040503、加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻。如果樣品中的果膠濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管，求平均值。加入物(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管蒸餾水0.5——系列果膠標(biāo)準(zhǔn)(1-5號(hào)管)—0.5—原果膠(或可溶性果膠)提取液——0.5

濃硫酸(沿管壁小心加入)333加蓋或塞沸水浴20min，迅速冷卻至室溫?！⒁猓簼饬蛩峋哂袕?qiáng)腐蝕性，應(yīng)小心操作，沿管壁緩慢加入。4、測(cè)定：加入PPAssaybuffer，避光靜置，當(dāng)顯色最深時(shí)以分光光度計(jì)，比色杯光徑，以空白調(diào)零，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管吸光度。如果測(cè)定原果膠含量，以原果膠提取液作為測(cè)定管；如果測(cè)定可溶性果膠含量，則以可溶性果膠作為測(cè)定管；如果測(cè)定總果膠含量，則同時(shí)以原果膠作為測(cè)定管和可溶性果膠作為測(cè)定管。計(jì)算：以1-5號(hào)管系列果膠標(biāo)準(zhǔn)(10、20、30、40、50四)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接計(jì)算直線回歸方程。果膠二原果膠+可溶性果膠。組織樣品的原果膠(或可溶性果膠)(pg)={mxVT}/(WxVs)式中：m二根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管果膠含量(pg)VT二原果膠(或可溶性果膠)提取液總體積(ml)W二樣品鮮重(g)Vs二加樣時(shí)所用原果膠(或可溶性果膠)提取液的體積(ml)=0.5液體樣品的原果膠(或可溶性果膠)(pg/ml)=mxN/V式中：m二根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管果膠含量(pg)N二稀釋倍數(shù)V二加樣時(shí)所用原果膠(或可溶性果膠)提取液的體積(ml)=0.5注意*項(xiàng)：1、 濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，應(yīng)小心操作，沿管壁緩慢加入。2、 取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)果膠含量適當(dāng)調(diào)整。3、 可溶性糖對(duì)測(cè)定結(jié)果有較大影響，應(yīng)徹底去除樣品中的可溶性糖。4、 PPAssaybuffer應(yīng)密閉避光保存，避免有效成分揮發(fā)。5