多維色譜分析在蛋白質(zhì)檢測中的應(yīng)用04081020王文博erasure2023/7/151目標(biāo)蛋白質(zhì)其它特征…等電點分子大小帶電狀況疏水性目標(biāo)蛋白的特征相對分子質(zhì)量erasure2023/7/152

根據(jù)以上信息，首先進行第一維分離,然后將第一維餾分再進行第二維分離。為了得到最大的分離效率,必須注意以下兩點:1.理想情況下,各維應(yīng)具有完全不同的分離機制;2.高維的分離速度應(yīng)快于低維的分離速度,以避免已分開的組分在高維分離中重新混合。erasure2023/7/153erasure形狀圖案形狀：第一維圖案：第二維2023/7/154Giddings理論

多維色譜的總峰容量(P)等于每一維的峰容量(Pi)的乘積。P=P1×P2×P3······erasure

假如兩種分離系統(tǒng)都有100的峰容量,那么良好的二維系統(tǒng)理論上可產(chǎn)生10000的峰容量。2023/7/155erasureGiddings指出峰容量的提高程度和樣品組分分布的有序程度有著密切的關(guān)系。

與一維分離模式相比,多維分離技術(shù)的最大特點是可極大地提高峰容量。樣品維數(shù)(sampledimen-sionality)2023/7/156erasure

只有當(dāng)這兩個維數(shù)相等時,才能充分發(fā)揮多維系統(tǒng)的分離能力。樣品維數(shù)大于系統(tǒng)維數(shù)：→組分的峰分布是無序的,會限制分離的效果。樣品維數(shù)小于系統(tǒng)維數(shù)：→盡管組分的峰分布是有序的,但多維系統(tǒng)的高峰容量的性能并沒有得到發(fā)揮。2023/7/157erasure無法識別2023/7/158erasure?2023/7/159erasure√2023/7/15101.什么是傳統(tǒng)機械按鍵設(shè)計？傳統(tǒng)的機械按鍵設(shè)計是需要手動按壓按鍵觸動PCBA上的開關(guān)按鍵來實現(xiàn)功能的一種設(shè)計方式。傳統(tǒng)機械按鍵設(shè)計要點：1.合理的選擇按鍵的類型，盡量選擇平頭類的按鍵，以防按鍵下陷。2.開關(guān)按鍵和塑膠按鍵設(shè)計間隙建議留0.05~0.1mm，以防按鍵死鍵。3.要考慮成型工藝，合理計算累積公差，以防按鍵手感不良。傳統(tǒng)機械按鍵結(jié)構(gòu)層圖：按鍵開關(guān)鍵PCBAerasure1.多維高效液相色譜(HPLC)3.多維高效液相色譜-毛細(xì)管電泳(HPLC-CE)2.多維毛細(xì)管電泳(CE)常見的多維色譜分析法2023/7/1512erasure多維高效液相色譜(HPLC)

即是將分離機理不同而又相互獨立的兩支色譜柱串聯(lián)起來構(gòu)成的分離系統(tǒng)。樣品經(jīng)過第一維的色譜柱進入接口中,通過濃縮、捕集或切割后被切換進入第二維色譜柱及檢測器中。在一維分離系統(tǒng)中不能完全分離的組分,可能在二維系統(tǒng)中得到更好的分離,分離能力、分辨率得到極大的提高。

以二維液相色譜為例：2023/7/1513erasure多維高效液相色譜技術(shù)在實際蛋白質(zhì)檢測中又分為：整體蛋白質(zhì)混合物的多維色譜分離技術(shù)。多肽混合物的分離技術(shù)。例2023/7/1514erasure在研究白血病細(xì)胞系蛋白質(zhì)組時待檢測蛋白質(zhì)混合物二維液相色譜分離--多維色譜預(yù)分離色譜聚焦根據(jù)不同蛋白質(zhì)的等電點不同進行分離非多孔填料的反相柱收集餾分濃縮和酶解2023/7/1515erasure基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI－TOF－MS)預(yù)處理后的餾分蛋白質(zhì)鑒定系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫另外,色譜分離還可與其他分離手段相結(jié)合,用于蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究中。2023/7/1516erasure離子交換色譜-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)計算機檢索(鑒定混合物中的蛋白質(zhì))。樣品(細(xì)胞、組織等)Trypsin酶解多肽混合物陽離子色譜柱(第一維色譜:強陽離子交換色譜分離,階梯梯度洗脫)進樣強陽離子交換色譜餾分進樣RP-HPLC(第二維色譜:RP-HPLC分離,線性梯度洗脫)RP-HPLC分離餾分進樣MS,MS/MS(多肽序列分析)2023/7/1517erasure色譜聚焦-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。親和色譜-反相液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。2023/7/1518erasure毛細(xì)管電泳的緩沖液通常是高離子強度、低揮發(fā)性,與質(zhì)譜的兼容性較差;

與LC-MS聯(lián)用相比,CE-MS聯(lián)用技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用尚處于起步階段,其關(guān)鍵問題在于CE與MS的接口尚不能滿足需要。主要原因是:(2)二者的工作速度不匹配。多維毛細(xì)管電泳(CE)2023/7/1519erasure實際操作中二維液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用多維高效液相色譜裝置圖