《中國藥典》2010年版

新儀器分析方法應(yīng)對李志偉2023/2/41現(xiàn)代分析技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)一步擴(kuò)大氣相色譜殘留溶劑紅外光譜原料藥、制劑毛細(xì)管電泳離子色譜HPLC檢測器總有機(jī)碳測定法（TOC）分析技術(shù)2023/2/42《中國藥典》2010年版一部新修訂項目

項目

類別鑒別檢查特征或指紋圖譜含量測定顯微TLCHPLCGC理化通則重金屬有害元素毒性成分其他HPLCTLCSUVGC其他中成藥10版新增259181825954426832162670912824105版收載28111441116102627810901

3213316194提取物10版新增21325111501617705版收載

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中藥材10版新增3745263226112712143141231793405版收載3393475

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1751320730合計10版新增63324923112134155431402432211381525163205版收載62015071616298136337282171

505473731342023/2/432010年版二部與2005年版藥典主要項目收載情況比對表增修訂項目2005年版2010年版紅外光譜鑒別原料530580制劑073有關(guān)物質(zhì)HPLC方法142707殘留溶劑2497滲透壓摩爾濃度445溶出度或釋放度315414含量均勻度165219無菌檢查方法107132細(xì)菌內(nèi)毒素216372含量測定HPLC法3596942023/2/44柱色譜紙色譜薄層色譜氣相色譜色譜法在2010年版藥典的應(yīng)用高效液相色譜離子色譜凝膠色譜毛細(xì)管電泳正相色譜反相色譜離子對色譜2023/2/45色譜法的應(yīng)用：紙色譜

紙色譜的基本原理-分配色譜固定相-吸附在濾紙上的水移動相-展開劑樣品在水和展開劑中的溶解度不同，故分配不同而達(dá)到分離。例：鹽酸苯乙雙胍2023/2/46色譜法的應(yīng)用：薄層色譜2010版藥典（二部）采用TLC的品種數(shù)量，共435個TLC品種數(shù)量硅膠G254個品種硅膠G254148個品種硅膠H15個品種硅膠HF25412個品種硅藻土2個品種微晶纖維素3個品種氧化鋁1個品種2023/2/47色譜法的應(yīng)用：氣相色譜進(jìn)樣方式品種數(shù)量直接進(jìn)樣75個頂空進(jìn)樣112個檢測方式品種數(shù)量FID181個ECD6個ECD檢查項目伊曲康唑殘留溶劑聯(lián)苯芐唑殘留溶劑恩氟烷殘留溶劑，有關(guān)物質(zhì)林旦乳膏含量，六六六林旦六六六異氟烷殘留溶劑，有關(guān)物質(zhì)2023/2/48色譜法的應(yīng)用：高效液相色譜20世紀(jì)70年代中期，HPLC儀開始出現(xiàn)，主要填料：10μm的無定型硅膠顆粒。70年代后期，發(fā)展了反相液相色譜。80年代，HPLC被廣泛應(yīng)用于化合物的分離，主要填料：粒徑為5～10μm球形硅膠。90年代早期，粒徑為5μm的高純硅膠，即所謂的B型硅膠被發(fā)展，并成為這個行業(yè)填料的標(biāo)準(zhǔn)，這種B型硅膠含有微量的金屬。90年代后期，為了滿足快速分離的需求，發(fā)展了3μm或3.5μm的球形硅膠，其作用和性能逐漸的獲得了人們的認(rèn)同和接受。手性色譜柱的開發(fā)。21世紀(jì)早期，為適應(yīng)超快速的分離要求，粒徑小于2μm

的填料被開發(fā)出來，發(fā)展出了整體柱、無機(jī)和有機(jī)雜化硅膠。目前，市場上流行的分析用的HPLC硅膠基質(zhì)填料主要為B型硅膠。填料發(fā)展史2023/2/49色譜法的應(yīng)用：高效液相色譜填料發(fā)展史2023/2/410色譜法的應(yīng)用：高效液相色譜色譜柱類型品種數(shù)C18柱1210個C8柱93個氰基柱21個硅膠柱31個苯基柱9個色譜柱類型品種數(shù)氨基柱5個丁基柱3個三甲基硅烷柱2個二羥基丙基硅烷鍵合硅膠柱1個苯乙烯-二乙烯基柱1個2010版藥典二部中色譜柱的使用情況2023/2/411纈沙坦a-酸性糖蛋白柱鹽酸帕羅西汀瑞格列奈手性色譜柱α1酸性蛋白柱瑞格列奈片苯磺酸順阿曲庫銨手性色譜柱chiralcelOD-RH注射用苯磺酸順阿曲庫銨甲氨蝶呤牛血清白蛋白鍵合硅膠柱甲氨蝶呤片注射用甲氨蝶呤色譜法的應(yīng)用：高效液相色譜2023/2/412色譜法的應(yīng)用：高效液相色譜2010版藥典主要修訂項目1、色譜柱（1）常用色譜柱填料粒徑3～10μm

（2）微徑柱填料粒徑約2μm（UPLC或UFLC）硬件須匹配色譜條件可適當(dāng)調(diào)整以品種正文規(guī)定條件的測定結(jié)果為準(zhǔn)

2、柱溫（1）通常為室溫（2）以硅膠為載體的普通色譜柱，最高使用溫度不得超過60℃，（HTLC）2023/2/413基本原理離子色譜中發(fā)生的基本過程就是離子交換，因此，離子色譜本質(zhì)上就是離子交換色譜。在離子色譜的基本組成中，重要的和與其他高效液相色譜不同的就是抑制器和電導(dǎo)檢測器，離子色譜用的泵是PEEK材料襯里的不銹鋼泵。色譜法的應(yīng)用：離子色譜色譜柱類型品種個數(shù)陽離子交換柱23個陰離子交換柱14個離子交換色譜法主要用于分析有機(jī)酸、氨基酸、多肽及核酸等離子型化合物的分離。2023/2/414色譜法的應(yīng)用：離子色譜陽離子交換柱山梨醇及制劑甘油果糖氯化鈉注射液甘露醇及制劑利巴韋林及制劑鹽酸二甲雙胍及制劑蘋果酸及制劑富馬酸及制劑陰離子交換柱肝素鈉及制劑帕米磷酸二鈉及制劑氯膦酸二鈉及制劑硫酸軟骨素鈉及制劑2023/2/415例：離子色譜（氯膦酸二鈉）照離子色譜法（附錄ⅤJ）試驗用陰離子交換色譜柱或效能相當(dāng)），柱溫30℃，以水為流動相A，以0.1mol/L氫氧化鉀溶液為流動相B，梯度洗脫，流速為1.2ml/min。檢測器為電導(dǎo)檢測器，檢測方式為抑制電導(dǎo)檢測。

用于氯膦酸二鈉原料藥的有關(guān)物質(zhì)與制劑的含量測定2023/2/416固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進(jìn)入孔中，滯留時間長；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如多糖、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。色譜法的應(yīng)用：凝膠色譜法2023/2/417常壓凝膠色譜頭孢尼西鈉頭孢唑肟鈉阿莫西林注射用頭孢尼西鈉注射用頭孢唑肟鈉阿莫西林膠囊頭孢他啶頭孢唑林鈉青霉素V鉀注射用頭孢他定注射用頭孢唑林鈉青霉素V鉀膠囊頭孢曲松鈉頭孢替唑鈉青霉素鈉注射用頭孢曲松鈉注射用頭孢替唑鈉注射用青霉素鈉頭孢呋辛鈉頭孢噻吩鈉青霉素鉀注射用頭孢呋辛鈉注射用頭孢噻吩鈉注射用青霉素鉀頭孢拉定頭孢噻肟鈉苯唑西林鈉頭孢哌酮鈉注射用頭孢噻肟鈉注射用苯唑西林鈉注射用頭孢哌酮鈉阿洛西林鈉美洛西林鈉氯唑西林鈉注射用阿洛西林鈉注射用美洛西林鈉注射用氯唑西林鈉普魯卡因青霉素磺芐西林鈉注射用普魯卡因青霉素注射用磺芐西林鈉2010版藥典二部采用常壓凝膠色譜的品種2023/2/418門冬酰胺酶（埃希）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度門冬酰胺酶（歐文）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（埃希）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（歐文）分子量5000~60000色譜親水改性硅膠,UV,純度抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)注射用抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)烏司他丁親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)烏司他丁溶液親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)胰島素親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)中性胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)精蛋白鋅胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種2023/2/419右旋糖酐20親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量1000~10000），有關(guān)物質(zhì)注射用頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量1000~10000），有關(guān)物質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種2023/2/420烏司他丁還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠，分子量烏司他丁溶液還原型SDS-聚丙烯酰胺凝膠，分子量肝素鈉乳膏鑒別（瓊脂糖電泳）2010版藥典二部采用電泳法的品種色譜法的應(yīng)用：電泳及毛細(xì)管電泳法2010版藥典二部采用CE的品種鹽酸頭孢吡肟有關(guān)物質(zhì)注射用鹽酸頭孢吡肟有關(guān)物質(zhì)抑肽酶有關(guān)物質(zhì)注射用抑肽酶有關(guān)物質(zhì)2023/2/421例：毛細(xì)管電泳（抑肽酶）sigma抑肽酶對照品毛細(xì)管電泳譜圖1：保留時間為18.417分鐘的是去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶，2：保留時間為18.617分鐘的是去丙氨酸-抑肽酶，3：保留時間為18.829分鐘的是抑肽酶峰2023/2/422例：毛細(xì)管電泳（抑肽酶）供試品毛細(xì)管電泳譜圖（杭州澳亞生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號：071015）2023/2/423例：毛細(xì)管電泳（抑肽酶）編號上海所結(jié)果去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶（%）去丙氨酸-抑肽酶（%）面積歸一化法計算抑肽酶主峰含量（%）16.96.263.626.96.783.037.06.284.347.76.081.455.84.315.264.34.814.875.24.314.3Sigma對照品6.26.981.5標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定8.0%7.5%/2023/2/424色譜法的應(yīng)用：毛細(xì)管電泳分離模式毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZE膠束電動毛細(xì)管色譜MEKC毛細(xì)管等電聚焦CIEF毛細(xì)管凝膠電泳CGE毛細(xì)管電色譜CEC高分子化合物的分析手性化合物的分析2023/2/425色譜法的應(yīng)用：液相色譜常用檢測器光學(xué)檢測器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測器）電化學(xué)檢測器：極譜、庫侖、安培電學(xué)檢測器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測器選擇性檢測器：靈敏度較高2023/2/426檢測器類型品種個數(shù)紫外檢測器1333個蒸發(fā)光散射檢測器28個示差檢測器10個電導(dǎo)檢測器5個2010版藥典二部采用檢測器情況色譜法的應(yīng)用：液相色譜常用檢測器2023/2/427色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器優(yōu)點(diǎn)：適用于沒有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測物，使用UV時靈敏度更低；無需衍生化而直接測定，避免了衍生帶來的誤差。可以應(yīng)用有強(qiáng)紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等。適用于組分復(fù)雜樣品的分析，可以進(jìn)行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測器，只要待測物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對不同物質(zhì)，ELSD相應(yīng)因子的變化比其它檢測器要小得多。對環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒有溶劑前緣峰，適用于保留時間短的物質(zhì)的檢測。與LC-MS的色譜條件一致，可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。2023/2/428色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器影響ELSD響應(yīng)的因素載氣流速、霧化器設(shè)計與溫度、流動相的組成和流速等影響霧化過程。被分析物的濃度和體積質(zhì)量決定了進(jìn)入光散射池的氣溶膠中的顆粒的直徑。被分析物的折射指數(shù)、光源發(fā)出的光的強(qiáng)度和波長、光電倍增管的位置等影響散射光強(qiáng)度。光電倍增管的靈敏度和入射光的強(qiáng)度決定了檢測的效率，反映為實驗者所觀測的峰面積。2023/2/429色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器妥布霉素硫酸慶大霉素妥布霉素滴眼液硫酸慶大霉素注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸奈替米星硫酸小諾霉素硫酸奈替米星注射液硫酸小諾霉素口服溶液硫酸依替米星硫酸小諾霉素片硫酸依替米星注射液硫酸小諾霉素注射液注射用硫酸依替米星硫酸巴龍霉素硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射用硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射液硫酸鏈霉素硫酸卡那霉素滴眼液注射用硫酸鏈霉素注射用硫酸卡那霉素大豆磷脂硫酸西索米星膽固醇硫酸西索米星注射液蛋黃卵磷脂2023/2/430色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器圖硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65℃，分流模式）總雜質(zhì)：5.26%2023/2/431色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器圖硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110℃，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%2023/2/432色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器謹(jǐn)慎使用，充分優(yōu)化實驗條件。企業(yè)質(zhì)控人員和藥檢所人員均需要。漂移管溫度的優(yōu)化：溫度對響應(yīng)值的影響無明顯的規(guī)律性。最優(yōu)溫度為在流動相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度。霧化氣流速的優(yōu)化：流速越大，響應(yīng)值越低。最優(yōu)氣體流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生最大檢測響應(yīng)值的最低氣體流速。2023/2/433色譜法的應(yīng)用：示差折光檢測器原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣中各組分濃度。優(yōu)點(diǎn)：通用型檢測器缺點(diǎn)：

1）對溫度變化敏感

2）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測

3）屬于中等靈敏度的檢測器2023/2/434色譜法的應(yīng)用：示差折光檢測器山梨醇山梨醇注射液甘露醇甘露醇注射液乳果糖口服溶液葡甲胺麥芽糖乳糖β-環(huán)糊精羥丙基-β-環(huán)糊精2023/2/435色譜法的應(yīng)用：電導(dǎo)檢測器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)含量。優(yōu)點(diǎn)：對流動相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫。缺點(diǎn)：對溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率增加2%-2.5%)。廣泛應(yīng)用于離子色譜。主要用于檢測水溶性無機(jī)和有機(jī)離子。2023/2/436色譜法的應(yīng)用：電導(dǎo)檢測器帕米膦酸二鈉注射液注射用帕米膦酸二鈉鹽酸頭孢吡肟注射用鹽酸頭孢吡肟氯膦酸二鈉氯膦酸二鈉注射液氯膦酸二鈉膠囊2023/2/437色譜法的應(yīng)用：質(zhì)譜檢測器2023/2/438色譜法的應(yīng)用：質(zhì)譜檢測器離子化方式：電噴霧大氣壓化學(xué)電離MALDI質(zhì)量分析器：四級桿離子肼飛行時間磁分析器傅立葉變換離子回旋共振方法學(xué)驗證的重要工具2023/2/439簡介

色譜質(zhì)譜的在線聯(lián)用將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性功能結(jié)合起來，實現(xiàn)對復(fù)雜混合物更準(zhǔn)確的定量和定性分析。而且也簡化了樣品的前處理過程，使樣品分析更簡便。色譜質(zhì)譜聯(lián)用包括氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)，液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用互為補(bǔ)充，分析不同性質(zhì)的化合物。

2023/2/440液質(zhì)聯(lián)用與氣質(zhì)聯(lián)用的區(qū)別:

氣質(zhì)聯(lián)用儀(GC-MS)是最早商品化的聯(lián)用儀器，適宜分析小分子、易揮發(fā)、熱穩(wěn)定、能氣化的化合物；用電子轟擊方式（EI）得到的譜圖，可與標(biāo)準(zhǔn)譜庫對比。

液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)主要可解決如下幾方面的問題：不揮發(fā)性化合物分析測定；極性化合物的分析測定；熱不穩(wěn)定化合物的分析測定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析測定；沒有商品化的譜庫可對比查詢，只能自己建庫或自己解析譜圖。

2023/2/441Neutral101102103104105MolecularWeightIonicAnalytePolarityIonSprayAPCIGC/MS2023/2/4422023/2/443常見術(shù)語:質(zhì)荷比:

離子質(zhì)量與它所帶電荷(以電子電量為單位計)的比值,寫作m/Z.峰:

質(zhì)譜圖中的離子信號通常稱為離子峰或簡稱峰.離子豐度:

檢測器檢測到的離子信號強(qiáng)度.基峰:

在質(zhì)譜圖中，指定質(zhì)荷比范圍內(nèi)強(qiáng)度最大的離子峰稱作基峰.總離子流圖；質(zhì)量色譜圖；準(zhǔn)分子離子；碎片離子；多電荷離子；同位素離子2023/2/444總離子流圖:在選定的質(zhì)量范圍內(nèi)，所有離子強(qiáng)度的總和對時間或掃描次數(shù)所作的圖,也稱TIC圖.2023/2/445

1.02.03.04.00102030405060708090100

1.02.03.04.05.06.00102030405060708090100質(zhì)量色譜圖總離子流圖2023/2/446準(zhǔn)分子離子:指與分子存在簡單關(guān)系的離子，通過它可以確定分子量.液質(zhì)中最常見的準(zhǔn)分子離子峰是[M+H]+或[M-H]-.在ESI中,往往生成質(zhì)量大于分子量的離子如M+1,M+23,M+39,M+18......稱準(zhǔn)分子離子,表示為:[M+H]+,[M+Na]+等2023/2/447碎片離子：準(zhǔn)分子離子經(jīng)過一級或多級裂解生成的產(chǎn)物離子.碎片峰的數(shù)目及其豐度則與分子結(jié)構(gòu)有關(guān),數(shù)目多表示該分子較容易斷裂,豐度高的碎片峰表示該離子較穩(wěn)定,也表示分子比較容易斷裂生成該離子。2023/2/448Ephedrine,MW=1652023/2/449如何看質(zhì)譜圖：(1)確定分子離子,即確定分子量氮規(guī)則：含偶數(shù)個氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是偶數(shù)，含奇數(shù)個氮原子的分子，其質(zhì)量數(shù)是奇數(shù)。與高質(zhì)量碎片離子有合理的質(zhì)量差，凡質(zhì)量差在3~8和10~13，21~25之間均不可能，則說明是碎片或雜質(zhì)。2023/2/450(2)確定元素組成，即確定分子式或碎片化學(xué)式高分辨質(zhì)譜可以由分子量直接計算出化合物的元素組成從而推出分子式低分辨質(zhì)譜利用元素的同位素豐度，例:2023/2/451有機(jī)質(zhì)譜的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):(1)定分子量準(zhǔn)確，其它技術(shù)無法比。(2)靈敏度高，常規(guī)10-7—10-8g,單離子檢測可達(dá)10-12g。(3)快速，幾分甚至幾秒。(4)便于混合物分析，LC/MS，MS/MS對于難分離的混合物特別有效,其它技術(shù)無法勝任。(5)多功能，廣泛適用于各類化合物。2023/2/452EI:電子轟擊電離—硬電離。CI:化學(xué)電離—核心是質(zhì)子轉(zhuǎn)移。FD:場解吸—目前基本被FAB取代。FAB:快原子轟擊(LSIMS,液體二次離子質(zhì)譜)。

ESI:電噴霧電離—屬最軟的電離方式。適宜極性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白質(zhì)分子多肽等)

APCI:大氣壓化學(xué)電離—同上，更適宜做弱極性小分子。APPI:大氣壓光噴霧電離—同上，更適宜做非極性分子。

MALDI:基體輔助激光解吸電離。通常用于飛行時間質(zhì)譜和FT-MS，特別適合蛋白質(zhì)，多肽等大分子．2023/2/4532023/2/454電噴霧（ESI）的特點(diǎn)

通常小分子得到[M+H]+]+,[M+Na]+或[M-H]-單電荷離子，生物大分子產(chǎn)生多電荷離子，由于質(zhì)譜儀測定質(zhì)/荷比，因此質(zhì)量范圍只有幾千質(zhì)量數(shù)的質(zhì)譜儀可測定質(zhì)量數(shù)十幾萬的生物大分子。電噴霧電離是最軟的電離技術(shù)，通常只產(chǎn)生分子離子峰，因此可直接測定混合物，并可測定熱不穩(wěn)定的極性化合物；其易形成多電荷離子的特性可分析蛋白質(zhì)和DNA等生物大分子；通過調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂（源內(nèi)CID）測定化合物結(jié)構(gòu)。2023/2/455大氣壓化學(xué)電離（APCI）特點(diǎn)

大氣壓化學(xué)電離也是軟電離技術(shù)，只產(chǎn)生單電荷峰，適合測定質(zhì)量數(shù)小于2000Da的弱極性的小分子化合物；適應(yīng)高流量的梯度洗脫/高低水溶液變化的流動相；通過調(diào)節(jié)離子源電壓控制離子的碎裂。2023/2/4562023/2/4573.流動相的選擇常用的流動相為甲醇、乙腈、水和它們不同比例的混合物以及一些易揮發(fā)鹽的緩沖液，如甲酸銨、乙酸銨等，還可以加入易揮發(fā)酸堿如甲酸、乙酸和氨水等調(diào)節(jié)pH值。LC／MS接口避免進(jìn)入不揮發(fā)的緩沖液，避免含磷和氯的緩沖液，含鈉和鉀的成分必須＜lmmol/l。（鹽分太高會抑制離子源的信號和堵塞噴霧針及污染儀器）含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸銨＜10一5mmol/l。送樣前一定要摸好LC條件，能夠基本分離，緩沖體系符合MS要求。2023/2/4584.流量和色譜柱的選擇不加熱ESI的最佳流速是1—50ul／min，應(yīng)用4.6mm內(nèi)徑LC柱時要求柱后分流，目前大多采用l—2.1mm內(nèi)徑的微柱，TIS源最高允許lml／min，建議使用200—400ul／minAPCI的最佳流速～lml／min，常規(guī)的直徑4.6mm柱最合適。為了提高分析效率，常采用＜100mm的短柱（此時UV圖上并不能獲得完全分離，由于質(zhì)譜定量分析時使用MRM的功能，所以不要求各組分沒有完全分離）。這對于大批量定量分析可以節(jié)省大量的時間。2023/2/459目標(biāo)化合物分析（1）選擇離子監(jiān)測（SIM）

SIM用于檢測已知或目標(biāo)化合物，比全掃描方式能得到更高的靈敏度。這種數(shù)據(jù)采集的方式一般用在定量目標(biāo)化合物之前，而且往往需要已知化合物的性質(zhì)。若幾種目標(biāo)化合物用同樣的數(shù)據(jù)采集方式監(jiān)測，那么可以同時測定幾種離子.2023/2/460目標(biāo)化合物分析（1）選擇離子監(jiān)測（SIM）

SIM用于檢測已知或目標(biāo)化合物，比全掃描方式能得到更高的靈敏度。這種數(shù)據(jù)采集的方式一般用在定量目標(biāo)化合物之前，而且往往需要已知化合物的性質(zhì)。若幾種目標(biāo)化合物用同樣的數(shù)據(jù)采集方式監(jiān)測，那么可以同時測定幾種離子.2023/2/461ExampleofProductIonSpectrumEphedrine,MW=1652023/2/462MS/MS2023/2/463MS/MS/MS（397）2023/2/464MS/MS/MS（365）2023/2/465MS/MS/MS（195）2023/2/466應(yīng)用示例2023/2/467高效液相色譜――電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定清開靈復(fù)方中膽酸

采用HPLC/MS/MS技術(shù)，從清開靈注射液中，通過分子量、二級質(zhì)譜碎片信息定性測定了清開靈復(fù)方中的膽酸。直接進(jìn)樣實驗。清開靈注射液經(jīng)過初步化學(xué)處理后采用電噴霧（ESI）離子源，在負(fù)離子掃描方式下，得到一極質(zhì)譜圖、即分子離子峰[M-H]-，再用二級質(zhì)譜（MS/MS）掃描目標(biāo)分子離子的碎片峰。再以相同的實驗條件對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測定，做出其一級、二級質(zhì)譜圖。2023/2/468通過對樣品進(jìn)行分子離子峰的掃描發(fā)現(xiàn)[M-H]-的峰中有一個很強(qiáng)的407，根據(jù)樣品處理過程以及對復(fù)方各單味藥材的研究，其應(yīng)該為一有機(jī)酸的負(fù)離子峰，并初步推斷其為膽酸。（膽酸的分子量為408）。如圖所示：通過對照樣品(右)和標(biāo)準(zhǔn)品（左）的二級質(zhì)譜圖，發(fā)現(xiàn)其主要碎片峰均吻合較好。2023/2/4692023/2/4702023/2/4712023/2/4722023/2/4732023/2/4742023/2/4752023/2/4762023/2/4772023/2/4782023/2/479用

LC-MS/MS檢測硝基呋喃類代謝物2023/2/4802023/2/4812023/2/4821、對有毒藥材和成藥千里光，采用LC-MS檢測其主要

有毒成分阿多尼弗林堿，限定含量不得超過0.004%

2、采用LC-MS檢測川楝子、苦楝皮中的川楝素2023/2/483農(nóng)藥殘留量測定法中藥中農(nóng)藥殘留量中藥材及飲片22個品種,共165批樣品1、方法學(xué)由單一GC法擴(kuò)大為GC、HPLC、GC/MS和LC/MS2、農(nóng)藥品種由24種（其中有機(jī)氯9、擬除蟲菊酯3和有機(jī)磷12）擴(kuò)充為色譜法124種（其中有機(jī)氯和擬除蟲菊57、有機(jī)磷54和氨基甲酸酯13），按色-質(zhì)聯(lián)用法統(tǒng)計則為128種。3、測定方法分兩個層次：一為色譜法（GC、HPLC）方法包括樣品前處理（提取、凈化）、色譜測定、色譜驗證和質(zhì)譜確證二為色-質(zhì)聯(lián)機(jī)法（GC/MS、LC/MS）方法包括樣品前處理（提取、凈化）、色-質(zhì)聯(lián)機(jī)測定2023/2/484農(nóng)藥分析質(zhì)譜圖及色譜圖53種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品GC/MS總離子流圖2023/2/48574種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品LC/MS/MS總離子流圖2023/2/48615種有機(jī)氯類農(nóng)藥對照品溶液色譜圖-ECD2023/2/48719種有機(jī)磷類農(nóng)藥對照品溶液色譜圖－FPD2023/2/488中藥指紋圖譜色譜指紋圖譜確實能夠反映中藥內(nèi)在質(zhì)量的整體變化情況和質(zhì)量的均一程度本質(zhì)上是藥典色譜技術(shù)在應(yīng)用上的延伸控制產(chǎn)品批與批間的穩(wěn)定切實可行。2005版收載高效液相色譜特征圖譜1項2010版收載高效液相色譜特征圖譜11項，指紋圖譜11項使整體性控制中藥質(zhì)量的方法學(xué)和實際應(yīng)用方面有了大幅度的提高，確保中藥質(zhì)量的均一穩(wěn)定2023/2/489中藥指紋圖譜中成藥收載指紋圖譜6項，特征圖譜2項。采用指紋圖譜檢測的品種桂枝茯苓膠囊天舒膠囊復(fù)方丹參滴丸注射用雙黃連腰痛寧膠囊諾迪康膠囊

采用特征圖譜檢測的品種烏靈膠囊百令膠囊2023/2/490注射用雙黃連指紋圖譜2023/2/491注射用雙黃連藥材、提取物、成品的相關(guān)性2023/2/492HPLC指紋圖譜HPLC指紋圖譜上的10個峰均得到了明確的指認(rèn)，指認(rèn)的峰面積之和已占總峰面積的89%。腫節(jié)風(fēng)2023/2/493123456S烏靈膠囊樣品色譜圖

2023/2/494本版藥典用于計算兩個圖譜相似程度的計算機(jī)軟件為國家藥典委員會發(fā)行的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》2023/2/495例：中藥中問題的解決1手性流動相添加劑解決了積雪草總苷等的同分異構(gòu)體色譜分離難題2指紋圖譜的控制保證了茵陳從基原、生產(chǎn)工藝,提取物及制劑的質(zhì)量3有關(guān)物質(zhì)的控制完善了薄荷腦的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2023/2/4961手性流動相添加劑解決了積雪草總苷等的同分異構(gòu)體色譜分離難題積雪草苷羥基積雪草苷多對烏蘇烷型和齊墩果烷型結(jié)構(gòu)異構(gòu)的同分異構(gòu)體主要成分原標(biāo)準(zhǔn)存在問題含量測定方法為紫外分光光度法，專屬性較差HPLC采用常規(guī)流動相，羥基積雪草苷難以與其同分異構(gòu)體分離解決方案加入手性流動相添加劑β-環(huán)糊精，實現(xiàn)積雪草苷、羥基積雪草苷多成分同系統(tǒng)定量困擾已久的難題2023/2/497積雪草總苷標(biāo)準(zhǔn)特征圖譜羥基積雪草苷

積雪草苷

羥基積雪草苷（medecassoside）C48H78O20積雪草苷B（asiaticosideB）C48H78O202023/2/4982指紋圖譜的控制保證了茵陳從基原、生產(chǎn)工藝到提取物及制劑的質(zhì)量

“綿茵陳”及“茵陳蒿”性狀完全不同有效成分差異較大藥材基原劃分藥材質(zhì)量控制以具利膽作用的綠原酸和對羥基苯乙酮為指標(biāo)建立綿茵陳的多成分含量測定藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)大幅提高提取物質(zhì)量控制對茵陳提取物進(jìn)行深入透徹的研究比較不同提取方法的指紋圖譜，提出最優(yōu)的提取工藝從根本保證了該提取物質(zhì)量的穩(wěn)定可控2023/2/499綠原酸

指紋圖譜及多成分含量測定等項目的建立，全面控制茵陳提取物質(zhì)量茵陳提取物的對照指紋圖譜1234567S8910茵陳金銀花梔子黃芩苷茵梔黃注射液指紋圖譜的11個共有峰的來源2023/2/4100有關(guān)物質(zhì)的控制完善了薄荷腦的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用GC-MS對其中三個主要的雜質(zhì)峰進(jìn)行歸屬闡明其化學(xué)結(jié)構(gòu)薄荷腦中雜質(zhì)歸屬全面的方法學(xué)考察對三個雜質(zhì)峰進(jìn)行全面的考察專屬性試驗穩(wěn)定性試驗全面反