ICS07080

A40.

中華人民共和國國家標準

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

DetectionofresidualDNAinbiologicalproductwhichexpressedfrom

ChinesehamsterovarCHOcell—

y()

Fluorescentquantitativepolymerasechainreactionassay

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

中華人民共和國

國家標準

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

GB/T34777—2017

*

中國標準出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100029)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網址

:

服務熱線

:400-168-0010

年月第一版

201711

*

書號

:155066·1-58352

版權專有侵權必究

GB/T34777—2017

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國生化檢測標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標準起草單位信達生物制藥蘇州有限公司中國測試技術研究院生物研究所

:()、。

本標準主要起草人孫左宇周李華李雪峰黃曉剛袁志軍郭燕紅

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T34777—2017

中國倉鼠卵巢CHO細胞表達產品

()

殘留DNA檢測熒光定量PCR法

1范圍

本標準規(guī)定了檢測殘留宿主的熒光定量法

DNAPCR。

本標準適用于中國倉鼠卵巢細胞宿主細胞系表達的生物制品的殘留宿主的檢測

CHO()DNA。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

31

.

Ct值cyclethreshold

每個反應管內熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環(huán)數(shù)

。

4縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

中國倉鼠卵巢

CHO:(ChineseHamsterOvary)

5原理

以真核細胞基因組中具有高拷貝數(shù)的為目的基因設計特異性擴增該基因的引

16SrRNA,PCR

物包括正向引物和反向引物

,:ForwardPrimer(5'-CCAGGCATTGGTGGCAC-3'):ReversePrimer

(5'-AGACAGGGTTTCTCTGT-3')。

采用熒光定量法采集熒光繪制出的擴增曲線值與擴增體系中起

SYBRPCR(FQ-PCR),PCRCt,

始目的基因模板的對數(shù)值呈反比以起始模板對數(shù)值為縱坐標值為橫坐標制作標準曲線

,DNA,Ct,。

根據(jù)標準曲線方程計算樣品的殘留量從而達到定量檢測樣品殘留的含量目的

DNA,DNA。

6儀器設備

61熒光定量儀含有熒光染料檢測通道

.PCR:SYBR。

62紫外可見分