ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34738—2017

蜜蜂囊狀幼蟲病熒光PCR檢測(cè)方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionofhoneybeessacbrooddisease

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34738—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國(guó)吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局吉林大學(xué)中華人民共和國(guó)福建出入境

:、、

檢驗(yàn)檢疫局

。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人宋戰(zhàn)昀馮新孟日增劉金華魏春艷牟峻王振國(guó)鄭騰孟慶峰蔡陽(yáng)肖成蕊

:、、、、、、、、、、、

王偉利

。

Ⅰ

GB/T34738—2017

蜜蜂囊狀幼蟲病熒光PCR檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜜蜂囊狀幼蟲病熒光檢測(cè)方法

PCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜜蜂及其幼蟲中囊狀幼蟲病的檢測(cè)

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T6682

出入境動(dòng)物檢疫采樣

GB/T18088

3試劑和材料

除非另有規(guī)定僅使用分析純?cè)噭┧性噭┚脽o(wú)酶污染的容器用焦碳酸二乙酯水處理

,。RNA(

后高壓滅菌分裝

)。

31水三級(jí)

.,GB/T6682,。

32蜜蜂囊狀幼蟲病毒

.。

33引物和探針上游引物下游引物

.,F1(10pmol/μL):5’-AAGTTGGAGGCGCGYATTTG-3’,

探針

R1(10pmol/μL):5’-CAAATGTCTTCTTACDAGAAGYAAGGATTG-3’,P1(5pmol/μL):

5’-FAM-CGGAGTGGAAAGAT-TAMRA-3’。

34磷酸鹽緩沖鹽水配制方法見(jiàn)

.,A.1。

35總抽提試劑

.RNA。

36氯仿

.。

37異丙醇

.。

38乙醇

.75%。

注用新開啟的無(wú)水乙醇和焦碳酸二乙酯水配制

:。

39焦碳酸二乙酯處理的水

.。

310反轉(zhuǎn)錄酶

.。

311酶抑制劑

.RNA(40U/μL)。

312反轉(zhuǎn)錄酶緩沖液

.5×。

313反應(yīng)緩沖液含鎂離子

.10×PCR()。

314聚合酶

.DNA(5U/μL)。

315三磷酸脫氧核糖核苷酸每種濃度均為

.(dNPTs