標準解讀

《GB/T 33409-2016 β-半乳糖苷酶活性檢測方法 分光光度法》是一項國家標準，規(guī)定了通過分光光度法測定β-半乳糖苷酶活性的具體方法。該標準適用于食品、飼料及其原料中β-半乳糖苷酶活性的測定。

根據(jù)此標準，β-半乳糖苷酶活性的測定基于底物對硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷（pNPG）在酶的作用下分解生成對硝基苯酚（pNP），后者在堿性條件下呈黃色，在特定波長下有最大吸收峰，通過測量其吸光度值來間接反映酶活性大小。具體步驟包括樣品處理、酶反應、終止反應以及比色測定等幾個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

首先，需將待測樣品進行適當處理，以釋放其中可能存在的β-半乳糖苷酶；然后，在一定條件下使酶與底物pNPG充分作用，產(chǎn)生pNP；接著使用NaOH溶液停止酶促反應，并同時使生成的pNP顯色；最后利用紫外可見分光光度計于405nm處測定吸光度值。通過比較不同濃度的標準品所獲得的吸光度曲線，可以計算出樣品中β-半乳糖苷酶的具體活性單位。


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....

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  • 2016-12-30 頒布
  • 2017-07-01 實施
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文檔簡介

ICS7104030

G66..

中華人民共和國國家標準

GB/T33409—2016

β-半乳糖苷酶活性檢測方法分光光度法

Determinationoftheactivityofbeta-galactosidase—Spectrophotometricmethod

2016-12-30發(fā)布2017-07-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T33409—2016

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由全國生化檢測標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC387)。

本標準起草單位深圳市計量質(zhì)量檢測研究院中國測試技術(shù)研究院

:、。

本標準主要起草人張世偉周李華賴心田陳血建唐棟洪曉明王珍妮楊國武

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T33409—2016

β-半乳糖苷酶活性檢測方法分光光度法

1范圍

本標準規(guī)定了乳酸克魯維酵母Kluveromceslactis脆壁克魯維酵母Kluveromces

(yy)、(yy

railis馬克斯克魯維酵母Kluveromcesmarxianus脆壁酵母Saccharomcesrailis大腸

fg)、(yy)、(yfg)、

桿菌Escherichiacoli米曲霉Aspergillusoryzae黑曲霉Aspergillusniger發(fā)酵生產(chǎn)的半乳

()、()、()β-

糖苷酶活性檢測方法

。

本標準適用于生化試劑工業(yè)酶制劑中半乳糖苷酶活性的測定

、β-。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

31

.

β-半乳糖苷酶活性單位beta-galactosidaseactivityunit

在規(guī)定的反應條件下每分鐘催化轉(zhuǎn)化一個微摩爾鄰硝基苯半乳糖苷的酶量

,-β-D-。

4原理

半乳糖苷酶能迅速催化鄰硝基苯半乳糖苷生成鄰硝基苯酚和半乳糖通過吸光度值的變化

β--β-D-,

得出鄰硝基苯酚的生成量計算出酶活

。

5儀器設(shè)備及器具

51計精確至

.pH:0.01pH。

52分析天平感量

.:0.0001g。

53紫外可見分光光度計波長準確度吸光度值精確至

.-:±1nm,0.001。

54石英比色皿

.1cm。

55恒溫水浴槽控溫精度

.:±0.5℃。

6試劑

除非另有規(guī)定本方法所用試劑均為分析純水為

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