標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 31787-2015 香石竹環(huán)斑病毒分子生物學(xué)檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為香石竹（通常指康乃馨）中的環(huán)斑病毒提供一種基于分子生物學(xué)技術(shù)的檢測手段。該標(biāo)準(zhǔn)詳細規(guī)定了從樣本采集到最終結(jié)果分析的整個流程，確保了檢測過程的一致性和準(zhǔn)確性。

標(biāo)準(zhǔn)首先明確了適用范圍，適用于疑似感染香石竹環(huán)斑病毒植物材料的快速準(zhǔn)確鑒定。接著介紹了所需的主要儀器設(shè)備與試劑，包括但不限于PCR儀、電泳系統(tǒng)以及特定引物等，這些是進行分子水平上病原體識別不可或缺的工具。

在樣品處理部分，《GB/T 31787-2015》給出了具體的指導(dǎo)步驟，包括如何正確地收集、保存及準(zhǔn)備待測樣本以避免污染或降解，保證后續(xù)實驗的有效性。此外，還特別強調(diào)了RNA提取的重要性，并提供了推薦的方法來獲得高質(zhì)量的核酸模板。

關(guān)于檢測方法本身，標(biāo)準(zhǔn)采用了RT-PCR技術(shù)作為核心手段，通過逆轉(zhuǎn)錄將病毒RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再利用特異性引物擴增目標(biāo)片段。此過程中使用的引物序列經(jīng)過精心設(shè)計，能夠特異性強且靈敏度高地識別出香石竹環(huán)斑病毒的存在與否。同時，為了驗證實驗體系的有效性，設(shè)置了陽性對照和陰性對照實驗。

最后，在結(jié)果判定環(huán)節(jié)，《GB/T 31787-2015》提出了明確的標(biāo)準(zhǔn)，即只有當(dāng)樣品擴增產(chǎn)物與預(yù)期大小相符，并且能夠在電泳圖譜中觀察到清晰條帶時，才可判定為陽性；反之則視為未檢出或陰性。這一步驟對于確保檢測結(jié)果可靠至關(guān)重要。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2015-07-03 頒布
  • 2015-11-27 實施
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GB/T 31787-2015香石竹環(huán)斑病毒分子生物學(xué)檢測方法_第1頁
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文檔簡介

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T31787—2015

香石竹環(huán)斑病毒分子生物學(xué)檢測方法

MoleculardetectionofCarnationringspotvirus

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

GB/T31787—2015

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局中華人民共和國天津出入境檢驗檢疫

:、

局上海市標(biāo)準(zhǔn)化研究院中華人民共和國珠海出入境檢驗檢疫局

、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人楊翠云于翠魏亞東楊瑞鈺張衛(wèi)東郭京澤胡培龍崔學(xué)慧

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31787—2015

香石竹環(huán)斑病毒分子生物學(xué)檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了香石竹環(huán)斑病毒的和實時熒光等分子生物學(xué)檢測

RT-PCR、IC-RT-PCRRT-PCR

方法

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物種苗中攜帶的香石竹環(huán)斑病毒的檢測

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

基因檢驗實驗室技術(shù)要求

SN/T1193

進出境植物及植物產(chǎn)品檢疫抽樣

SN/T2122

3儀器設(shè)備用具和試劑

、

31儀器設(shè)備

.

儀實時熒光定量儀超凈工作臺電子天平電泳儀電泳槽凝膠成像系

PCR、PCR、、(1/10000g)、、、

統(tǒng)水浴鍋高速冷凍離心機超低溫冰箱高壓滅菌鍋制冰機微波爐漩渦振蕩器

、、、-80℃、、、、。

32用具

.

可調(diào)式微量移液器及相應(yīng)的無吸頭無離

(2L、10L、100L、200L、1000L)RNase、RNase

心管管和研缽等μμμμμ

、PCR。

33試劑

.

試劑見附錄試劑見附錄

RT-PCR(B),IC-RT-PCR(C)。

4癥狀觀察及抽樣

41癥狀觀察

.

現(xiàn)場檢疫主要觀察進境植物材料上病毒為害的癥狀為害癥狀描述參見附錄

,CRSVA。

42抽樣

.

發(fā)現(xiàn)有病毒為害癥狀的植物材料直接送檢未發(fā)現(xiàn)癥狀的則按中規(guī)定進行抽樣并送

;,SN/T2122,

實驗室進行病毒檢測鑒定

。

5病毒檢測

51RT-PCR方法

.

將送檢植物樣品中有疑似病毒為害癥狀的植物組織液氮研細取用于提取植物總?cè)缓?/p>

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