11ICS5.150B52四川DB51省地方標(biāo)準(zhǔn)DB/TXXXX-2022克氏原螯蝦白斑綜合征診斷和防控技術(shù)規(guī)程(終審稿)2022-XX-XX發(fā)布2022-XX-XX實(shí)施四川省市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB1/TXXXX-2022I前言 I 2規(guī)范性引用文件 13術(shù)語與定義 14試劑和材料 15設(shè)備和器械 26流行情況及臨床檢查 27實(shí)驗(yàn)室樣品采集 38DNA提取 39DNA提取質(zhì)量及體系監(jiān)控 4 前言出。麗、耿毅、陳德芳、歐陽萍1克氏原螯蝦白斑綜合征診斷和防控技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了由白斑綜合征病毒(Whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)白斑綜合征的臨床癥狀、病原鑒定方法與結(jié)斑綜合征的流行特征，同時(shí)給出了防控方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于克氏原螯蝦白斑綜合征的診斷以及四川稻田和池塘養(yǎng)殖克氏2規(guī)范性引用文件修改單)適用于本文件。GBT分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法SCT物檢疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)規(guī)范NY-2002無公害食品水產(chǎn)品中漁藥殘留限量NY-2002無公害食品漁用藥物使用準(zhǔn)則3術(shù)語與定義綜合征4試劑和材料.1試劑檢驗(yàn)中所需試劑的配制按照GB/T28630和SC/T7014的規(guī)定執(zhí)行，TaqDB1/TXXXX-202224.2水PCA4.3引物bpp設(shè)備和器械R流行情況及臨床檢查流行情況殖中主要病害之一。臨床癥狀剖檢量白色斑點(diǎn)。其余器官如肝胰腺、鰓等無明顯變化。DB1/TXXXX-20223實(shí)驗(yàn)室樣品采集DNA提取樣品準(zhǔn)備8.1.1活體或冰凍的仔蝦及幼蝦個(gè)體樣品(去蝦眼)約0.1g；活體或冰凍的于新配制的75%酒精中5min，無菌水8.2.1加入500μL抽提緩沖液(A.2)，震蕩混勻，37℃溫育1h；L心管，加入等體積酚-三氯甲烷-異戊醇(A.4)，顛8.3微量分光光度計(jì)測定核酸濃度和純度4L品，酸濃度和純度的測定；DNAAA80應(yīng)在1.7~1.9之間，若比值較高說明9DNA提取質(zhì)量及體系監(jiān)控CRL積的雙蒸水代替DNA模板。DB1/TXXXX-20225TAE瓊脂糖顆粒進(jìn)入溶液。，以減少水份蒸發(fā);lDNA含量偏低，則可依上述比例增加上樣量，但總體積不可超過樣品槽容量。nPCR序列比對(duì)DB1/TXXXX-2022611.3.337℃水浴將凍結(jié)的凝膠融化后，在漩渦震蕩儀上震蕩1min~2min；LA置-20℃保存，待測；12.3被檢測樣品：第一步PCR后在1447bp處有條帶或第二步PCR后在為克氏原螯蝦白斑綜合征：7B苗種規(guī)格宜為150尾/kg~200尾/kg。苗種放養(yǎng)前，應(yīng)用1%~3%氯化鈉對(duì)苗種進(jìn)行浸泡，浸泡時(shí)間為7min~10min。劑防控續(xù)投喂5天~7天，劑量參照商品藥物的說明書執(zhí)行。每年4~7月期間，每隔10天~15天應(yīng)使用1次微生物制劑(如:光合菌、藥制劑8DB1/TXXXX-20229性附錄)試劑配方A.1焦炭酸二乙酯(DEPC)處理水A.2抽提緩沖液A.3蛋白酶K(20mg/mL)將蛋白酶K溶解于雙蒸水中，至終濃度20mg/mL，分裝入小管，置-20℃A.4酚-三氯甲烷異戊醇(25:24:1)A.510mol/L乙酸銨mA.670%乙醇TAE在400mL雙蒸水中溶解121gTris堿，加入28.55mL冰乙酸和50mlEA.8TE緩沖液(pH8.0)將0.121gT