1、腫瘤生物治療進(jìn)展ppt一、腫瘤生物治療概念的演變 手術(shù)治療、放射治療（放療）、化學(xué)治療（化療）是應(yīng)用機(jī)械、物理和化學(xué)的原理來治療腫瘤. 生物治療是應(yīng)用生物大分子（細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)和肽）或調(diào)節(jié)生物反應(yīng)的小分子化合物來治療腫瘤。1894,William B.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴(kuò)散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導(dǎo)致腫瘤消退呢？January 12, 1862 April 16, 1936A storyColey 采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術(shù)的肉瘤患者腫瘤完全消退!滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對

2、1000 患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley 與他的女兒 Dr.Helen Coley Nauts 利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖 現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)干擾素上市。 抗病毒抗腫瘤腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達(dá)調(diào)控失常，腫瘤細(xì)胞的信號通路與正常細(xì)胞的信號通路存在一定的差異。 生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋白、細(xì)胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號通路為主要作用靶點(diǎn)，發(fā)展腫瘤選擇性強(qiáng)、毒副反應(yīng)低、高治療指數(shù)的治療技術(shù)和藥物。 有足夠的

3、臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長腫瘤患者的生存期，改善預(yù)后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)和藥物主要包括： 細(xì)胞因子單克隆抗體免疫效應(yīng)細(xì)胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點(diǎn)的非細(xì)胞毒性小分子藥物三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：結(jié)核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御免疫系統(tǒng)-人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會變成癌細(xì)胞)。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時清除突變的癌

4、細(xì)胞。機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞相互作用的結(jié)果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅癌癥細(xì)胞;另一方面，癌癥細(xì)胞的大量增殖會進(jìn)一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細(xì)胞有多種機(jī)制來逃脫免疫細(xì)胞的識別與殺傷。1.什么是免疫？我們生存在一個充滿復(fù)雜感染源的、敵對的世界里，我們的機(jī)體可以利用許多機(jī)制來防御外來微生物的侵襲，保護(hù)機(jī)體健康，這種防御能力被稱為免疫。 免疫的類型天然免疫反應(yīng)：先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機(jī)體抵御病原體侵襲的第一道防線； 獲得性免疫反應(yīng)：后天獲得、具有針對性、具有免疫記憶性。 免疫器官：骨髓、胸腺、脾臟、淋巴

5、結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等； 免疫組織：消化道、呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞等 免疫分子：補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子等 免疫系統(tǒng)功能4. 發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞免疫分子天然免疫系統(tǒng)：肥大細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、中性/嗜堿性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞； 特異性免疫細(xì)胞：T細(xì)胞、B細(xì)胞對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對病原體作出反應(yīng)。在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。作為清道夫細(xì)胞清除機(jī)體死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片。巨噬細(xì)胞（M）在不同組織中其名稱不同粒細(xì)胞

6、: 中性粒細(xì)胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時釋放并殺滅病原體。DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞 DC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁 樹突狀細(xì)胞 (DC)天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁 淋巴細(xì)胞:T B NK獲得性免疫天然免疫紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無特征HE 染色 電鏡觀察無功能活性-初始淋巴細(xì)胞 遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。 B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞) T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞) B-細(xì)胞受體(BCR)

7、抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細(xì)胞受體 (TCR) 殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細(xì)胞記憶性T細(xì)胞記憶性B細(xì)胞活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞-CD8+T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞為其它細(xì)胞的活化和功能提供必須的信號-CD4+T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制其它淋巴細(xì)胞的活性并協(xié)助控制免疫應(yīng)答效應(yīng)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)殺傷自然殺傷細(xì)胞（Natural killer cells，NK）形態(tài)比T 、B 細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。是天然免疫的重要成員, 在獲得性免疫應(yīng)答之前對控制病毒感染非常重要；在外周血單個核細(xì)胞中占10%-15%，淋巴結(jié)和組織中較少。不表達(dá)抗

8、原特異性受體，也不形成免疫記憶。NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”腫瘤細(xì)胞表達(dá)腫瘤抗原1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原 (TSA): 僅在腫瘤細(xì)胞上表達(dá); 腫瘤相關(guān)性抗原 (TAA): 在某些腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，也在某些正常細(xì)胞上表達(dá)。 泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達(dá)的抗原物質(zhì)。機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為：基因突變；細(xì)胞癌變過程中使原本不表達(dá)的基因被激活；抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表

9、達(dá)；外源性基因（如病毒基因）的表達(dá)。 1感應(yīng)階段： 1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細(xì)胞對抗原的識別2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2. 獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)答的基本過程APC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+T抗原遞呈功能MHC限制性APCAPCB細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T 細(xì)胞（CTL）輔助性T細(xì)胞 (Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應(yīng)細(xì)胞CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;Th細(xì)胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細(xì)胞的生長中起重要的作用。（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離

10、CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細(xì)胞結(jié)合CTL細(xì)胞質(zhì)重排(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細(xì)胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)，故稱為體液免疫?？贵w的抗腫瘤機(jī)制?A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞 跨膜孔道B.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC) C.抗體的調(diào)理作用 腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細(xì)胞結(jié)合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞抗體細(xì)胞惡變后其表面可過表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長。針對這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細(xì)胞表面的

11、受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。 抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。 抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細(xì)胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用（1）自然殺傷細(xì)胞（NK） NK是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，對于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。 NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒: NK細(xì)胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。NK靶細(xì)胞B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN-,TNF-/,GM-CS

12、F,IL-12。干擾素(IFN-)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。C.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用 (ADCC)（2）巨噬細(xì)胞（M) 活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細(xì)胞；活化的M還可分泌TNF、NO等細(xì)胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細(xì)胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細(xì)胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補(bǔ)體成分纖維蛋白結(jié)合蛋白凝血因子其它因子M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋

13、巴細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞（M）抗原肽T淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體MHC-抗原肽復(fù)合物五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adoptive cellular immunotherapy，ACI）是轉(zhuǎn)輸體外培養(yǎng)、修飾的效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞，治療疾病。細(xì)胞治療可以被認(rèn)為是利用自體或異體細(xì)胞，替換、修復(fù)或增強(qiáng)受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。ACI治療腫瘤：具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，清除術(shù)后和化療后的殘留腫瘤細(xì)胞； 預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。 NK 細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 DCs LAKs CIKs TLR 激動劑刺激免疫細(xì)胞I

14、I.抗原特異性 T 細(xì)胞 CTL TILACI的類型：I. 非特異性免疫細(xì)胞1. NK細(xì)胞用于過繼轉(zhuǎn)輸Science. 2011, 7; 331(6013): 4449.NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞 腫瘤可以發(fā)展多種機(jī)制逃逸NK細(xì)胞的攻擊或者誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能缺陷 NK細(xì)胞在腫瘤患者中功能低下J Biomedicine and Biotechnology,2011免疫監(jiān)視功能缺陷免疫抑制System administration細(xì)胞因子 自體NK細(xì)胞( IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, type I IFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物 )體內(nèi)活化NK細(xì)胞治療腫瘤

15、的策略 抗體(anti-HER-2 MAb;anti-CD20 MAb;anti-EGFR Mab) InfusionADCCNATURE IMMUNOLOGY 2008, 9(5):486 In 1980 Table 2 Clinical trials using strategies to modulate NK cell functions (continued)Table 2 Clinical trials using strategies to modulate NK cell functions (continued)Rituximab: anti-CD20; Trastuzuma

16、b: anti-HER2; Daclizumab: anti-IL-2Ra Ex vivo自體 NK細(xì)胞單倍體相合的 NK細(xì)胞細(xì)胞因子 ( IL-2, IL-12, IL-15, IL-18, IL-21, type-1 IFNs， 免疫調(diào)節(jié)藥物 ) 通過細(xì)胞因子刺激,腫瘤患者的本身的NK細(xì)胞難于有效回復(fù)抗腫瘤功能 自身免疫細(xì)胞在體外活化NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用(1) 原代NK細(xì)胞通過免疫磁珠的方法純健康供體NK細(xì)胞, 這些NK細(xì)胞具有正常的細(xì)胞表面標(biāo)志、胞內(nèi)細(xì)胞因子、穿孔素和顆粒酶B。供者患者過繼轉(zhuǎn)輸原代 NK細(xì)胞原代NK細(xì)胞在體外擴(kuò)增和活化13-21天, 大大提高轉(zhuǎn)移的腎細(xì)胞癌患者的臨床反應(yīng)。N

17、K細(xì)胞在外周血中的比例低 (1015%)，不能持續(xù)增殖；產(chǎn)生高純度的、大量的自體或異基因活化NK細(xì)胞非常難，并費(fèi)時、費(fèi)力；每個患者或者供者的NK的差異性對臨床常規(guī)治療帶來困難。 障礙/困難YT, NK-YS, HANK-1, NK-92, NKL, KHYG-1 ，NKG(2) NK細(xì)胞系 Japan EBV-positive Western countries ChinaNK-92 cells NK-92 cell: CD56brightCD16-高效廣譜抗腫瘤作用，表達(dá)大量活化型受體；高水平表達(dá)與細(xì)胞凋亡途徑有關(guān)的分子及細(xì)胞毒效應(yīng)分子；對惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、白血病淋巴瘤等都具有

18、高效的殺傷活性。NK-92細(xì)胞容易大量擴(kuò)增，適合標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗(yàn)，是目前最強(qiáng)的、適于臨床應(yīng)用的NK細(xì)胞系。大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系2. 淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK） 1980年, Rosenberg 及其同事建立了一種IL-2刺激產(chǎn)生大量的淋巴細(xì)胞的新方法, 這些淋巴細(xì)胞可以殺傷新鮮的、沒有培養(yǎng)的、原代轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。LAK 細(xì)胞是細(xì)胞毒性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒活性不受 MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細(xì)胞和NK抵抗的腫瘤細(xì)胞系, 在功能上與NK細(xì)胞不同。LAK細(xì)胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時間重復(fù)輸注，以保持一定數(shù)量的新鮮的LAK細(xì)胞。1984年, Rosenberg

19、及其同事被FDA批準(zhǔn)，IL-2和 LAK 用于治療25例腫瘤患者，包括腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、肺癌或結(jié)腸癌。LAK細(xì)胞的制備：腫瘤患者的外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）在體外擴(kuò)增，IL-2刺激，培養(yǎng)約5天。 培養(yǎng)后的LAK是異質(zhì)性的，含有CD3-CD56+, CD3+CD56+ 和 CD3+CD56-細(xì)胞；其中 CD3+CD56+ T和CD3CD56+NK 細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用。臨床研究證明, LAK細(xì)胞對轉(zhuǎn)移性腫瘤如腎細(xì)胞癌和黑色素瘤有一定療效。 LAK/IL-2 的主要限制是其毒性： 全身應(yīng)用IL-2 通常是造成副作用的主要原因，包括煩躁, 發(fā)熱, 寒冷,頭痛,惡心,嘔吐,皮疹,水腫，25%患者

20、可以發(fā)生副反應(yīng)。男性呼吸道窘迫綜合征、肝臟毒性和脈管炎有報(bào)道。3. 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK） CIK是通過培養(yǎng)外周血淋巴細(xì)胞(PBL)，培養(yǎng)第一天在培養(yǎng)基中加入IFN- 1000 u/ml, 24小時后加入抗CD3抗體 50ng/ml和IL-2 300IU/ml。定期加入IL-2,培養(yǎng)基常規(guī)性換液，培養(yǎng)2128天?；颊吡馨图?xì)胞體外患者自體CIK CIK細(xì)胞中CD3+ CD4+ (37.4%)、CD3+ CD8+ (64.2%); CD3CD56+ NK 細(xì)胞含量小 (2%)，培養(yǎng)14天時，37.7% 為CD3+CD8+CD56+的 自然殺傷T (NKT)細(xì)胞，是CIK中最強(qiáng)的細(xì)胞毒性細(xì)

21、胞。與LAK細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)；CIK細(xì)胞在識別和殺傷靶細(xì)胞時是非MHC限制性的。CIK的第一例臨床試驗(yàn)是在 1999年，由Schmidt-Wolf等在德國進(jìn)行，自體CIK細(xì)胞轉(zhuǎn)入IL-2 基因，轉(zhuǎn)述給10例腫瘤患者，包括轉(zhuǎn)移性腎癌、結(jié)腸癌和淋巴瘤。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。除了 3例患者有發(fā)熱的癥狀外，沒有嚴(yán)重的副反應(yīng)。一項(xiàng)來自中國的報(bào)道，用CIK輔助治療急性白血病, 19例接受14個療程自體CIK細(xì)胞輸注聯(lián)合化療的患者中,73.4%在隨后的4年中維持持續(xù)緩解,只作化療的患者僅為27.3%。 作為免疫治療方式, CIK治療腫瘤量較小的患者有效或者作為輔助

22、治療, 不適合用于治療腫瘤量較大的患者。CIK的機(jī)制:釋放炎癥因子, 如IFN, TNF, 穿孔素, 顆粒酶B殺傷腫瘤細(xì)胞; 通過 Fas-Fas L 途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CIK 已經(jīng)成功用于臨床治療胃癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤、白血病等。 II.抗原特異性 T 細(xì)胞T細(xì)胞在抗腫瘤的免疫應(yīng)答中細(xì)胞免疫起著主要作用，特別是CTL，它是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，故也應(yīng)是用于過繼免疫治療的最佳細(xì)胞。 T細(xì)胞活化抗原遞呈細(xì)胞腫瘤細(xì)胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達(dá)識別與殺傷腫瘤細(xì)胞抗原的識別與遞呈淋巴結(jié)CD8+T 細(xì)胞CD8+T 細(xì)胞血液循環(huán)腫瘤血管遷移Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強(qiáng)于LAK和NK，且

23、能特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)量，但到一定水平時候，體內(nèi)的CTL到達(dá)平穩(wěn)期而不再增加，這主要是由于體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTL的擴(kuò)增。所以，利用細(xì)胞因子或免疫刺激劑直接活化腫瘤患者體內(nèi)CTL受到限制。在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞。轉(zhuǎn)輸抗原特異性T細(xì)胞因?yàn)槟[瘤相關(guān)抗原TAA是“自身”抗原，免疫系統(tǒng)難于識別；腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對腫瘤應(yīng)答的T細(xì)胞, 甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。 4. 腫瘤浸潤的淋巴細(xì)胞 (TIL)1986年, Rosenberg 及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明, 聯(lián)合自

24、體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。之后很快在 1988年首次報(bào)道了利用TIL 治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤能夠誘導(dǎo)腫瘤緩解。如何制備TIL?大約需要 56 周TIL增殖:粘附的腫瘤細(xì)胞死亡或被淋巴細(xì)胞殺死而消失生長24 周鑒定TIL 殺傷腫瘤的活性直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中快速擴(kuò)增: 抗CD3 抗體, IL-2 和滅活的同種異體PBMCs飼養(yǎng)細(xì)胞，2周轉(zhuǎn)輸患者挑選應(yīng)答最強(qiáng)的細(xì)胞克隆維持 TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失清除淋巴細(xì)胞，減少與 TIL競爭細(xì)胞因子,如IL-7和IL-15; 清除內(nèi)源性Treg. 六、TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì) 什么是TLR？Toll-like receptor，

25、Toll樣受體。是一類模式識別受體，能夠識別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細(xì)胞膜內(nèi)體TLR1廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、NK細(xì)胞；TLR2/4/5主要分布于除T、B、NK細(xì)胞以外的免疫細(xì)胞；TLR3主要表達(dá)于未成熟的DC等；TLR7-TLR9主要表達(dá)于單核細(xì)胞、DC細(xì)胞核巨噬細(xì)胞。TLRs與腫瘤免疫治療 腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激分子缺失促凋亡分子 通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導(dǎo)的免疫

26、抑制狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用。 作為腫瘤生物治療的關(guān)鍵問題是打破腫瘤導(dǎo)致的免疫耐受狀態(tài)！TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用外用乳膏 靜脈注射 口服 瘤內(nèi)注射 皮下注射 TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強(qiáng)大的抗腫瘤潛力。(1)天然ssRNA及其衍生物: 通過內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，然后與TLR-7相互作用。 TLR7ssRNA：單鏈RNADC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細(xì)胞，產(chǎn)生IFN-并增強(qiáng)細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長TLR-7 激動劑ssRNA機(jī)制:(2)合成的TLR7激動劑Imiquimod (咪喹莫特):HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤

27、(淺表性基底細(xì)胞癌 sBCC), III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為7982%；癌變前的光線性角化病治療。外用乳膏 機(jī)制:誘導(dǎo)細(xì)胞因子如 IFN-和 IL-12產(chǎn)生; 增強(qiáng)腫瘤特異性CTLs的活化；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。 有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行, Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗(yàn)有10項(xiàng)。 PolyI:C(多聚肌苷酸-胞苷酸), 合成的病毒dsRNA類似物誘導(dǎo) I型 IFNs的產(chǎn)生分子式: (C10H13N4O8P)x.(C9H14N3O8P)x激動劑dsRNA：雙鏈RNA成熟DC, 其活化抗原特異性T細(xì)胞的能力增強(qiáng), CD4+ T細(xì)胞向Th1方向分化，分泌大量IFN。Ovarian cancer patients在人類, TLR9 主要表達(dá)于B細(xì)胞和pDCsCpG ODNs（人工合成的非甲基化雙鏈寡核苷酸），分為三種類型: CpG-A,NK細(xì)胞強(qiáng)刺激劑，誘導(dǎo)pDCs產(chǎn)生; CpG-B,中度IFN-誘導(dǎo)劑,增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答; CpG-C,兼具CpG-A和CpG-B的免疫刺激能力。只有 CpG-B 型進(jìn)入臨床激動劑已經(jīng)對以下人類腫瘤進(jìn)行評價:腎細(xì)胞癌、惡性膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、皮膚性 T淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤。機(jī)制:pDC 和 mDC 活化,Th1類細(xì)胞因子譜,減少引流淋巴結(jié)中的Treg