高效液相色譜法思考題和習(xí)題1 簡述高效液相色譜法和氣相色譜法的主要異同點。相同點：均為高效、高速、高選擇性的色譜方法，兼具分離和分析功能，均可以在線檢測 不同點： 分析對象及范圍流動相的選擇操作條件GC能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點較低的樣品，占有機物的20%流動相為有限的幾種“惰性”氣體，只起運載作用，對組分作用小加溫常壓操作HPLC溶解后能制成溶液的樣品，高沸點、高分子量、難氣化、離子型的穩(wěn)定或不穩(wěn)定化合物，占有機物的80%流動相為液體或各種液體的混合。它除了起運載作用外，還可通過溶劑來控制和改進分離。室溫、高壓下進行2離子色譜法、反相離子對色譜法與離子抑制色譜法的原理及應(yīng)用范圍有何區(qū)別？離子色譜法(Ion Chromatography) ：用離子交換樹脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動相。以電導(dǎo)檢測器為通用檢測器。試樣組分在分離柱和抑制柱上的反應(yīng)原理與離子交換色譜法相同。離子色譜法是溶液中陰離子分析的最佳方法，也可用于陽離子分析。反相離子對色譜法(IPC或PIC) ：反相色譜中，在極性流動相中加入離子對試劑，使被測組分與其中的反離子形成中性離子對，增加k和tR，以改善分離。適用于較強的有機酸、堿。反相離子抑制色譜：在反相色譜中，通過加入緩沖溶液調(diào)節(jié)流動相pH值，抑制組分解離，增加其k和tR，以達到改善分離的目的。適用于極弱酸堿物質(zhì)（pH=37弱酸；pH=78弱堿；兩性化合物）3速率理論方程式在HPLC中與在GC中有何異同？如何指導(dǎo)HPLC實驗條件的選擇？解:液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素為渦流擴散、流動的流動相傳質(zhì)、滯留的流動相傳質(zhì)以及柱外效應(yīng)。在氣相色譜中徑向擴散往往比較顯著，而液相色譜中徑向擴散的影響較弱，往往可以忽略。另外，在液相色譜中還存在比較顯著的滯留流動相傳質(zhì)及柱外效應(yīng)。在高效液相色譜中，對液液分配色譜，Van Deemter方程的完整表達形式為由此，HPLC的實驗條件應(yīng)該是：小粒度、均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度流動相，流速不宜過快；柱溫適當。4試討論影響HPLC分離度的各種因素，如何提高分離度？(1) 色譜填充性能液相色譜柱分離性能的優(yōu)劣，是由固定相粒度、柱長、由柱內(nèi)徑和填充狀況決定的柱壓降這三個參數(shù)度決定的。這三個參數(shù)度也決定了樣品組分的保留時間，保留時間不僅與色譜過程的熱力學(xué)因素k有關(guān)，還直接與決定柱效與分離度的柱性能參數(shù)及流動相的黏度有關(guān)，這些參數(shù)都是影響色譜分離過程動力學(xué)的重要因素。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術(shù)要求非常高的工作，一般都是購買商品柱，很少自行制備。(2) 流動相及流動相的極性液相色譜中，改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接因素。液相色譜不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。因此大多是恒溫分析。流動相選擇在液相色譜中顯得特別重要，流動相可顯著改變組分分離狀況。(3) 流速流速大于0.5 cm/s時， Hu曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實際操作中，流量仍是一個調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。5指出苯、萘、蒽在反相色譜中的洗脫順序并說明原因。三者極性順序從大到小是苯、萘、蒽，因此在反相色譜中的洗脫順序為苯、萘、蒽，苯最先出峰。6宜用何種HPLC方法分離下列物質(zhì)？（1）乙醇和丁醇；（2）Ba2+和Sr2+；（3）正戊酸和正丁酸；（4）相對分子質(zhì)量的的葡糖苷。（1）正相鍵合相色譜法 （2）離子交換色譜法（3）離子對色譜法（4）空間排阻色譜法7外標法測定黃芩顆粒中的黃芩苷的質(zhì)量分數(shù)。 8內(nèi)標校正因子法計算炔諾酮和炔雌醇的質(zhì)量分數(shù)。 9測定生物堿試樣中黃連堿和小檗堿的含量，稱取內(nèi)標物、黃連堿和小檗堿對照品各0.2000g配成混合溶液。測得峰面積分別為3.60105, 3.43105和4.04105mVs。稱取0.2400g內(nèi)標物和試樣0.8560g同法配制成溶液后，在相同色譜條件下測得峰面積為4.16105, 3.71105和4.54105mVs。計算試樣中黃連堿和小檗堿的質(zhì)量分數(shù)。（黃連堿26.2%，小檗堿27.3%）10用15cm長的ODS柱分離兩個組分。柱效n=2.84104m1；測得t0=1.31min；組分的min；=4