學習是一本打開的書 你能從中看出未來的抱負微生物及無菌操作 微生物是什么 微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微小 直徑小于1mm 結構簡單 肉眼看不見 必須藉助光學或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬倍才能觀察到的生物 需要說明的是 微生物是一個比較籠統(tǒng)的概念 界線有時非常模糊 如單細胞藻類和一些原生動物也應算是微生物 但通常它們并不放在微生物中進行研究 微生物具有以下特點 體積小 面積大 吸收多 轉化快 2000倍體重 h 生長旺 繁殖快 20min分裂一次 易變異 適應強 分布廣 種類多 10萬種以上 Microorganism 我們所生活的環(huán)境中 到處都存在著大量的微生物 在一般空氣中 微生物達800 3500個 m3 在土壤中達1 500 108個 g 在嚴重污染的水中可達107個 ml 飲用水要求細菌總數(shù) 100個 ml 大腸桿菌 3個 ml 經水塔或貯水池貯存后 短期內可繁殖至105 106個 ml 人的頭皮上有140萬個 cm2 兩手上約有4 40萬個 1g指甲污垢有38億個 1g糞便可達10 1000億個 可以說微生物是無處不在 無處不有 許多以前被人們認為是極端 高溫 高壓 強酸 強堿 低溫等 甚至是致死的環(huán)境 現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著各種類型的微生物 稱為極端微生物 事實說明 微生物有特別頑強的生存 繁殖和變異能力來適應環(huán)境 微生物種類繁多 有的對人有益 有的有害 有的無益也無害 但在藥品生產過程中 不可能對環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對待 為保證藥品的安全有效 需要對其進行控制 空氣中的微生物多數(shù)附著在灰塵上 或以芽孢形式懸浮于空氣中 1 m以下者處于懸浮狀態(tài) 10 m以上者會逐漸沉下來而形成菌塵 所以也要對塵粒進行控制 大量臨床資料表明 注射劑 尤其是靜脈注射劑 如污染了7 12 m的塵粒 可導致熱原反應 肺動脈炎 微血栓或異物肉芽腫等 嚴重的還會致人死命 而如果污染了細菌 輕則局部紅腫化膿 重則引起全身細菌性感染 因此 對微生物和塵粒進行更加嚴格的控制對于針劑生產潔凈室非常重要 人是潔凈室最大的污染源 占90 左右 一般男性每人每分鐘向周圍排放1000個以上的含菌粒子 女性為750個以上 穿無菌服時 靜止時的發(fā)菌量為10 300個 min 一般活動時發(fā)菌量為150 1000個 min 行走時發(fā)菌量為900 2500個 min 咳嗽一次發(fā)菌量為70 700個 min 噴嚏一次為4000 60000個 min 所以在潔凈室中 人的數(shù)量和活動應有特別嚴格的限制 無處不在的微生物 1 營養(yǎng)物 水分 碳源 氮源 無機鹽類 生長因子 2 pH值 各種微生物都有其最適宜的pH值 大多數(shù)細菌最適pH為6 8 7 4 但一般有較大的容忍度 在4 9也可存活和生長 少數(shù)細菌能在極端pH值范圍內生長 真菌適于pH值3 6的微酸性環(huán)境 但在2 10也可生長 3 溫度 微生物適于生長繁殖要有適宜的溫度 當超過其最低或最高可耐受的溫度時 即停止生長或死亡 一般細菌最適溫度為30 40 真菌為20 30 4 氧氣 大多數(shù)細菌和所有霉菌都是需氧菌 在有氧環(huán)境中才能生長 少數(shù)細菌是厭氧菌 在無氧環(huán)境中才能生長 有些細菌和酵母菌是兼性需氧厭氧的 在有氧或無氧環(huán)境中都能生長繁殖 5 滲透壓 微生物細胞膜和所有生物膜一樣是一種半透膜 可讓水自由通過 對溶質則有選擇性 由于細胞壁的保護 微生物能存活在低滲透壓的水中 而在高滲溶液 如高濃度的鹽溶液或糖溶液 40 甘油 中 細胞會脫水并停止生長繁殖 但也有一些專性耐高鹽細菌只有在高鹽 10 15 條件下才生長 6 表面張力 表面活性劑可降低表面張力 它是影響細菌生長的因素之一 很多革蘭氏陰性菌 特別是大腸菌群可很好地在表面活性劑包圍的介質中生長 而大多數(shù)革蘭氏陽性菌在表面張力低時 0 05N m 不能很好生長 陽離子表面活性劑對很多有機體有毒性 陰離子表面活性劑毒性很小 非離子表面活性劑幾乎沒有毒性 并可成為某些微生物的營養(yǎng)物 微生物生長的影響因素 潔凈室的凈化度標準Cleanlinessofcleanroom 滅菌 系指用物理或化學等方法殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的手段 滅菌法 系指殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的方法或技術無菌 系指在任一指定物體 介質或環(huán)境中 不得存在任何活的微生物 無菌操作法 系指在整個操作過程中利用和控制一定條件 使產品避免被微生物污染的一種操作方法或技術防腐 系指用物理或化學方法抑制微生物的生長與繁殖的手段 亦稱抑菌 對微生物的生長與繁殖具有抑制作用的物質稱抑菌劑或防腐劑 消毒 系指用物理或化學方法殺滅或除去病原微生物的手段 對病原微生物具有殺滅或除去作用的物質稱消毒劑 滅菌方法與無菌操作 基本概念 01 目的提高藥物制劑的安全性保護制劑的穩(wěn)定性保證制劑的臨床療效 滅菌方法與無菌操作 分類 02 滅菌法物理滅菌法化學滅菌法無菌操作法 利用蛋白質與核酸具有遇熱 射線不穩(wěn)定的特性 采用加熱 射線和過濾方法 殺滅或除去微生物的技術稱為物理滅菌法 物理滅菌法 1 干熱滅菌法 2 濕熱滅菌法 3 濾過除菌法 4 射線除菌法 系指在干燥環(huán)境中進行滅菌的方法 1 干熱滅菌法 火焰滅菌法 干熱空氣滅菌法 1 1火焰滅菌法 系指用火焰直接灼燒滅菌的方法 該法適用于耐火焰材質 如金屬 玻璃及瓷器等 的物品與用具的滅菌 不適合藥品的滅菌 1 2干熱空氣滅菌法 系指用高溫干熱空氣滅菌的方法 該法適用于耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕氣穿透的油脂類 如油性軟膏基質 注射用油等 和耐高溫的粉末化學藥品的滅菌 不適于橡膠 塑料及大部分藥品的滅菌 系指用飽和蒸氣 沸水或流通蒸氣進行進行滅菌的方法 2 干熱滅菌法 熱壓滅菌法 煮沸滅菌法 流通蒸汽滅菌法 低溫間接滅菌法 2 1熱壓滅菌法 系指用高壓飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的方法 能殺滅所有細菌繁殖體和芽孢 適用于耐高溫和耐高壓蒸汽的所有藥物制劑 玻璃容器 金屬容器 瓷器 橡膠塞 濾膜過濾器等 滅菌溫度 蒸氣表壓 和時間 115 67kPa 30min 121 97kPa 20min 126 139kPa 15min 系指采用過濾法除去微生物的方法 該法屬于機械除菌方法 該機械稱為除菌過濾器 該法適用于對熱不穩(wěn)定的藥液 氣體 水等物品的滅菌 對滅菌用過濾器應有較高要求 常用的除菌過濾器 0 22 m的微孔濾膜器和G6垂熔玻璃濾器 3 濾過除菌法 系指采用輻射 微波和紫外線殺滅微生物和芽孢的方法 4 射線滅菌法 輻射滅菌法 微波滅菌法 紫外線滅菌法 4 1紫外線滅菌法 UV200 300nm 254 257nm最強原理1 促使核酸蛋白變性 2 使產生臭氧 共同殺菌后用于空氣滅菌和表面滅菌 效果與微生物敏感性有關 對酵母或霉菌力弱 紫外線的殺菌效果Bactericidaleffectofultravioletrays 系指用化學藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法 殺菌劑是指對微生物具有觸殺作用的化學藥品 分為氣體殺菌劑和液體殺菌劑 殺菌劑只對微生物繁殖體有效 不能殺滅芽孢 殺菌效能決定于微生物的種類與數(shù)量 物體表面光潔度或多孔性以及殺菌劑的性質等 化學滅菌法 該法適用于環(huán)境消毒和不耐熱的醫(yī)用器具 設備和設施等的消毒 亦用于粉末注射劑的消毒 常用的氣態(tài)殺菌劑 環(huán)氧乙烷 甲醛 丙二醇 甘油和過氧乙酸 氣體滅菌法 該法常作為其他滅菌法的輔助措施 適用于皮膚 無菌器具和設備的消毒 常用的消毒液有 75 乙醇 1 聚維酮碘溶液 0 1 0 2 新潔爾滅溶液 酚或煤酚皂溶液等 藥液滅菌法 系指整個過程控制在無菌條件下進行的一種操作方法 該法適用于一些不耐熱藥物的注射液 眼用制劑 皮試液 海綿劑和創(chuàng)傷制劑的制備 無菌操作法 無菌操作室的滅菌 無菌操作 1 無菌操作室的滅菌 常采用紫外線 液體和氣體滅菌法對無菌操作室環(huán)境進行滅菌 常用甲醛溶液加熱熏蒸法 液態(tài)甲醛 氣體發(fā)生裝置 蒸氣加熱夾層鍋 甲醛蒸氣 鼓風機 濕度 60 溫度 25 無菌室關閉熏蒸12 24h 25 氨水 除氣 2 無菌操作 無菌操作的場所 無菌操作室 層流潔凈工作臺 無菌操作柜 無菌操作的所用物品 器具 環(huán)境操作人員即操作環(huán)境中的物體表面 空氣中除了你瓶中培養(yǎng)的微生物 沒有其它活的微生物 確保培養(yǎng)菌的純凈 主要有紫外線空氣殺毒 噴灑滅菌水在無菌室 酒精燈火焰操作 無菌操作 無菌技術是在醫(yī)療護理操作過程中 保持無菌物品 無菌區(qū)域不被污染 防止病原微生物侵入人體的一系列操作技術 無菌技術作為預防醫(yī)院感染的一項重要而基礎的技術 醫(yī)護人員必須正確熟練地掌握 在技術操作中嚴守操作規(guī)程 以確保病人安全 防止醫(yī)源性感染的發(fā)生 無菌操作的概念 1 無菌技術 aseptictechnique 是指在執(zhí)行醫(yī)療 護理技術過程中 防止一切微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術和管理方法 2 無菌物品 asepticsupply 經過物理或化學方法滅菌后 未被污染的物品稱無菌物品 3 無菌區(qū)域 asepticarea 經過滅菌處理而未被污染的區(qū)域 稱無菌區(qū)域 4 非無菌區(qū) non asepticarea 未經滅菌或經滅菌后被污染的物品或區(qū)域 稱非無菌物品或區(qū)域 5 相對無菌區(qū) relativeasepticarea 相對無菌區(qū)指無菌物品自無菌容器內一經取出 就認為是相對無菌 不可再放回 無菌區(qū)邊緣向內3cm為相對無菌區(qū) 6 污染物品 infectant 污染物品指未經過滅菌處理 或滅菌處理后又被污染的物品 原則 1 操作前準備 1 操作環(huán)境應清潔 寬敞 定期消毒 物品布局合理 無菌操作前半小時應停止清掃工作 減少走動 避免塵土飛揚 2 工作人員應做好個人準備 戴好帽子 口罩 修剪指甲并洗手 必要時穿無菌衣 帶無菌手套 2 操作中保持無菌 1 工作人員應面向無菌區(qū) 手臂應保持在腰部或操作臺臺面以上 不可跨越無菌區(qū)避免面對無菌區(qū)談笑 咳嗽 打噴嚏 2 用無菌持物鑷取用物品 無菌物品一經取出 即使未用 也不可放回無菌容器內 一套無菌物品僅供一位患者使用 避免交叉感染 3 無菌操作中 無菌物品疑有污染或已被污染 應予更換并重新滅菌 3 無菌物品保管 1 無菌物品必須與非無菌物品分開放置 2 無菌物品不可暴露于空氣中 應存放于無菌包或無菌容器中 無菌包外須標明物品名稱 滅菌日期 并按失效期先后順序排放 3 定期檢查無菌物品的滅菌日期及保存情況 無菌包在未被污染的情況下保存期一般為7天 過期或受潮應重新滅菌 無菌操作有何意義 做到三重保護 1 無菌操作本身保證樣品的真實性 避免對樣品的污染 2 無菌操作同時也包括了對操作者的要求 因此也保護了操作者本身的安全 3 無菌操作一般都是在特定的生物安全柜進行 這樣也利用了生物安全柜的特性 保證操作中形成的氣溶膠不會擴散到環(huán)境中 因此也是對環(huán)境的保護 洗手涮手消毒手 1 洗手執(zhí)行無菌操作 取用清潔物品之前 護理病人前后 接觸污染物之后均應洗手 方法 用肥皂搓洗手掌 手背 指間 手指及關節(jié) 以環(huán)形動作搓擦 而后用流水沖洗雙手 將皂沫全部沖凈 必要時反復沖洗 最后用清潔小毛巾擦干雙手 2 涮手即利用機械及化學作用去除手上污物及微生物的方法 是做好消毒隔離 預防交叉感染的重要措施 方法 取無菌刷蘸肥皂乳 或肥皂塊 先刷指尖 然后刷手 腕 前臂 肘部到上臂下1 2段 特別要刷凈甲溝 指間 腕部 無遺漏地刷洗三遍 每遍3分鐘 刷洗時 雙手稍抬高 每遍刷完后 用流水沖去肥皂沫 水由手 上臂至肘部淋下 手不能放在最低位 以免臂部的水返流到手 刷洗畢 用無菌小毛巾依次拭干手 臂 手 臂不可觸碰其它物品 如污染必須重新刷洗 3 消毒手消毒液泡手能有效地去除手上的微生物 方法 刷洗后 雙手及上臂下1 3伸入盛有消毒液的桶內 用無菌小毛巾輕擦洗皮膚5分鐘 手不可觸及桶口 浸泡畢 擰干小毛巾 揩去手 臂 消毒液 晾干 雙手保持于胸前半伸位準備穿手術衣 1空氣培養(yǎng)2無菌采集護士手樣3口腔中細菌培養(yǎng)4手機上細菌培養(yǎng)5錢包上細菌培養(yǎng)注 每組5個培養(yǎng)基 實驗分組 5組 1室內清潔 干燥的條件下進行空氣采樣 并關上門窗 2紫外線消毒照射60分鐘最佳 關閉后30分鐘內完成 以清晨采樣為最佳 3瓊脂平皿放置位置 離地面0 8 1 5m 距墻1m 4采樣點 房間面積大于30平方米的取個點 5將平皿打開后 蓋子倒扣在平皿邊緣 蓋子不可朝天 暴露5分鐘后加蓋 6每個平皿做好標記 寫上地點及標志 檢驗目的是為空氣培養(yǎng) 空氣培養(yǎng)采樣方法 1洗手七步法 用肥皂反復洗手 自然晾干 用無菌干拭子從一只手大拇指的第二節(jié)根部至手的中指尖 正反兩面來回涂擦10次 每只手的檢測面積為100c 然后涂布方式進行 2平板手印法 打開平皿用要檢測的手直接輕輕按下即可 蓋好平板 無菌采集手樣本 1傳統(tǒng)的棉拭子法 用無菌的棉拭子在口腔中對應的左上 坐下 右上 右下四個方位采集 2用生理鹽水漱口后同樣方法檢測 3采集的位置 口腔側壁 牙齦 溝 口腔中細菌采集 1用無菌棉簽擦拭手機的正面 方面和側面 然后將棉簽在培養(yǎng)基上做涂布法涂布 2將手機用75 的酒精擦拭后再用無菌棉簽擦拭 再將棉簽進行涂布法涂布 手機上細菌采集 直接將紙幣在培養(yǎng)基上輕輕按上即可 用75 的酒精擦拭錢包表面 再用無菌棉簽擦拭再在培養(yǎng)基上做涂布 直接用無菌棉簽擦拭錢包表面直接涂布 錢與錢包上的細菌采集 Thanks 顯微鏡下區(qū)別細菌和真菌 顯微鏡下真菌和細菌的形態(tài)差別還是很明顯的 細菌一般都要經過染色之后才能觀察 而真菌個體